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文檔簡介
1、第一部分載黑色素脂質納泡造影劑的制備及其特性研究
目的:制備一種載生物內源性光吸收子—黑色素的脂質納泡造影劑,檢測其基本特性并考察體外超聲/光聲顯像效果。
方法:采用乙醚滴定法制備包裹黑色素的脂質納米微球,再通過真空冷凍干燥法充入全氟丙烷(C3F8)氣體,制備載黑色素的脂質納泡造影劑。檢測其基本形態(tài)、結構,粒徑、表面電位,黑色素含量以及紫外可見光波長范圍內的吸收光譜。在體外瓊脂糖凝膠模型中考察其不同濃度的超聲和光聲顯
2、像效果。與MDA-MB-231細胞孵育,檢測不同時間內(6h,12h,24h)細胞的活性情況及細胞對造影劑的吞噬情況。
結果:通過乙醚滴定法成功制備出包裹黑色素的脂質納米微球,光鏡下觀察微球形態(tài)規(guī)則,大小分布均勻,平均粒徑為(284.20±85.54)nm,表面電位為(-51.30±5.98)mV。透射電鏡下可見黑色素顆粒較均勻地分布于脂質微球內。紫外可見分光光度計測得黑色素的含量為95.10μg/mg。在300nm~800n
3、m波長范圍內,均有較強的光吸收能力,隨著波長的增加光吸收值逐漸降低。經真空冷凍干燥充入C3F8氣體溶于雙蒸水后,呈棕黑色混懸液,分散性較好。體外超聲顯像,能夠明顯地增強基波及諧波顯影效果,回聲強度隨濃度的增加而增強;在光聲顯像中,具有較強的光聲成像能力,光聲信號隨濃度增加而增強。臺盼藍拒染法測得造影劑對細胞活性無明顯影響。激光共聚焦顯微鏡觀察,細胞質內見大量經DiI標記的紅色熒光造影劑聚集。細胞吞噬造影劑后,進行光聲顯像,隨孵育時間增加
4、,光聲信號強度呈增強趨勢。
結論:成功制備出性能穩(wěn)定,粒徑較小,大小均勻,分散性較好,生物安全性高的載黑色素的新型脂質納泡造影劑,能夠同時用于超聲、光聲雙模態(tài)顯像,有望成為一種新型的基于超聲顯像的多模態(tài)分子探針。
第二部分載黑色素脂質納泡造影劑增強腫瘤超聲、光聲成像實驗研究
目的:建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,考察并評價載黑色素脂質納泡造影劑體內腫瘤超聲、光聲顯像效果。
方法:采用乙醚滴定法和真空冷凍
5、干燥法制備載黑色素脂質納泡造影劑。建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,經尾靜脈注入造影劑后,動態(tài)觀察腫瘤模型實質內超聲及光聲顯像強化情況,應用DFY型超聲圖像定量分析診斷儀和Vevo LAZR軟件對腫瘤興趣區(qū)超聲及光聲信號進行定量分析,評價其顯像效果。注射造影劑(經DiI標記)2h后,采集標本,行快速冰凍切片,激光共聚焦顯微鏡觀察造影劑在腫瘤組織中聚集效果。
結果:成功制備了載黑色素脂質納泡造影劑,在裸鼠移植瘤模型中,經尾靜脈注射造
6、影劑后,超聲諧波信號及光聲信號得到較明顯地增強;在超聲造影實驗中,注射造影劑15 s后回聲信號達到峰值,然后逐漸降低,大約12min后回聲信號基本消失;在光聲顯像實驗中,注射造影劑后30 min內光聲信號強化較弱,而后明顯增強,大約3h后光聲信號達到峰值。激光共聚焦顯微鏡顯示,腫瘤組織間隙內見大量的DiI標記的紅色熒光造影劑聚集。
結論:載黑色素脂質納泡造影劑具有增強體內超聲及光聲顯像能力,能夠透過腫瘤新生毛細血管內皮間隙,具
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