NAG-1在雙氯芬酸鈉防治ERCP術后胰腺炎中的作用機制.pdf

1、研究一：雙氯芬酸鈉影響ERCP術后胰腺炎中NAG-1水平的臨床研究
　　背景：逆行性胰膽管造影術（EndoscopicRetrograde Cholangio-Pancreatography,ERCP）是目前臨床診治膽胰系統(tǒng)疾病的重要方法。但由于ERCP屬于侵入性方法，反復插管使十二指腸乳頭及括約肌損傷致胰管內壓升高，造影劑反復顯影和過度充盈、胰管機械性損傷等可導致一系列相關并發(fā)癥，主要有ERCP術后急性胰腺炎（post-ERCP

2、 pancreatitis,PEP）、消化道出血、穿孔、膽道感染等，其中最常見和最嚴重的并發(fā)癥為PEP，其發(fā)生率為1％-10%，高?；颊甙l(fā)生率可達30%，故PEP的防治十分重要。國內外廣泛研究生長抑素及其類似物、鈣離子拮抗劑、硝酸甘油、IL-10、肝素、蛋白酶抑制劑、甾體類抗炎藥等對PEP的預防作用，但目前尚無統(tǒng)一的研究結論。非甾體類抗炎藥(non-steroidal anti-inflammatory drugs，NSAIDs)在預防

3、PEP中的作用得到多項研究肯定，在NSAIDs預防PEP的作用機制中，NAG-1的作用逐漸受到關注。由于NAG-1具有一定的抗炎作用，因此，本研究擬探討雙氯芬酸鈉對術后胰腺炎的預防作用，并對其可能機制進行研究。
　　目的：探討雙氯芬酸鈉對PEP的預防作用，同時探討雙氯芬酸鈉對PEP中NAG-1水平的影響。
　　方法：收集2012年9月-2013年10月于我院進行ERCP患者120例，隨機分為雙氯芬酸鈉組和對照組，每組60例，

4、雙氯芬酸鈉組患者ERCP術后立即肌注奧爾芬1支（含雙氯芬酸鈉75mg），收集兩組患者術前、術后3h及術后24h血液行淀粉酶檢測，并觀察腹痛發(fā)生情況，計算兩組患者PEP發(fā)生率。各組測定30例術前、術后3h及術后24h ERCP患者血清中NAG-1水平，同時通過RT-PCR及WesternBlot方法檢測血漿中NAG-1 mRNA及蛋白表達情況。
　　結果：雙氯芬酸鈉組PEP發(fā)生率（6.67%）低于對照組（20.00%）。雙氯芬酸鈉組

5、術后3h、24h淀粉酶活性分別為（202.70±120.44）U/L和（209.13±157.14）U/L，低于對照組的（283.57±178.39）U/L和（305.97±208.69）U/L（P均<0.05）。雙氯芬酸鈉組術后3hNAG-1水平高于術前及對照組術后3h（P均<0.05）。同時，雙氯芬酸鈉組患者ERCP術后3h血漿中NAG-1 mRNA和蛋白表達較術前及對照組術后3h高（P均<0.01）。
　　結論：雙氯芬酸鈉具

6、有預防PEP發(fā)生的作用，可能與促進NAG-1水平增加相關。
　　研究二：NAG-1在雙氯芬酸鈉防治小鼠急性胰腺炎中的作用探討
　　背景：PEP是ERCP術后最常見、最嚴重的并發(fā)癥之一，目前大量研究證實，NSAIDs藥物可用于PEP的預防，并推測NSAIDs可能通過抑制PG的合成和阻斷胰腺炎的炎癥級聯(lián)反應預防PEP發(fā)生。雙氯芬酸鈉是NSAIDs藥物之一，是COX及PLA2的抑制劑，我們以前研究證實，雙氯芬酸鈉具有預防PEP發(fā)生

7、的作用，應用雙氯芬酸鈉的ERCP術后患者血清中NAG-1水平、NAG-1mRNA及蛋白表達量均明顯升高，提示雙氯芬酸鈉可能通過促進NAG-1的表達減少胰腺炎的發(fā)生。為進一步闡述NAG-1在雙氯芬酸鈉防治PEP過程中的作用機制，我們通過制備小鼠胰腺炎模型，探討并闡述雙氯芬酸鈉預防PEP的可能機制，為雙氯芬酸鈉防治PEP提供實驗和理論依據(jù)。
　　目的：探討雙氯芬酸鈉對雨蛙肽誘導小鼠急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP

8、）的作用及可能機制。
　　方法：采用C57BL/6小鼠通過腹腔注射雨蛙肽方法建立AP模型，實驗分為正常對照組、AP組、AP+雙氯芬酸鈉組。AP組小鼠雨蛙肽50μg/kg腹腔注射，1次/h，共7次；AP+雙氯芬酸鈉組小鼠在雨蛙肽注射前1h腹腔注射15mg/kg雙氯芬酸鈉1次；正常對照組腹腔注射相同體積的生理鹽水。實驗結束時處死小鼠，留取血清采用比色法檢測淀粉酶、脂肪酶活性，采用ELISA方法檢測IL-1?、IL-6、IL-8、TNF

9、-ɑ及NAG-1水平，采用RT-PCR及Western Blot方法檢測NAG-1mRNA和蛋白表達量；制備胰腺和肺組織勻漿，采用ELISA方法檢測IL-1?、IL-6、IL-8、TNF-ɑ、NAG-1水平，采用比色法檢測髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)活力，采用RT-PCR及Western Blot方法檢測NAG-1mRNA和蛋白表達量；測量胰腺、肺濕重與小鼠體重比；胰腺和肺組織HE染色觀察病理學改變。

10、　　結果：AP組血清淀粉酶及脂肪酶活性、胰腺和肺濕重與小鼠體重比均較正常對照組高（P<0.05），AP+雙氯芬酸鈉組較AP組較AP組不同程度降低（P<0.05）。AP組胰腺組織可見胰腺間質充血水腫，小葉間隙增寬，腺泡腫脹，大量炎細胞浸潤；肺組織可見肺間質增寬，大量炎細胞浸潤，AP+雙氯芬酸鈉組胰腺及肺部病理炎癥反應減輕，病理評分差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。AP組血清IL-1?、IL-6、IL-8、TNF-ɑ水平、胰腺和肺勻漿IL

11、-1?、IL-6、IL-8、TNF-ɑ水平和MPO活力均較正常對照組不同程度升高（P<0.05），AP+雙氯芬酸鈉組上述指標較AP組不同程度降低（P<0.05）。三組血清中NAG-1表達的差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。在胰腺和肺組織中，AP組NAG-1水平較正常對照組升高（P<0.05），AP+雙氯芬酸鈉組較AP組升高（P<0.05）。在血漿、胰腺和肺組織中，AP組NAG-1mRNA和蛋白表達水平較正常對照組不同程度升高（P<0.0