人臍血間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)與擴增的實驗研究.pdf

1、目的：1.探討人臍血來源的間充質(zhì)干細胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）在體外分離培養(yǎng)與擴增的可行性。
　　 2.探討不同培養(yǎng)基濃度下人臍血間充質(zhì)細胞（HMSCs）培養(yǎng)的差異。
　　 方法：在無菌條件下收集正常足月胎兒的臍帶血，經(jīng)復合枸櫞酸鈉抗凝，用相對密度為1.077g/L的Ficoll淋巴細胞分離液分離臍血的單個核細胞（Mononuclear，MNC），分兩組，一組以20％胎牛血清濃度的培養(yǎng)基

2、進行培養(yǎng)和擴增，一組以30％胎牛血清濃度的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)和擴增，用流式細胞儀檢測人臍血MSCs的表面標志。
　　 結(jié)果：
　　 1.來源于人臍血的單個核細胞接種于20％胎牛血清濃度的培養(yǎng)基中后，可產(chǎn)生貼壁細胞，但數(shù)量稀少不能傳代，接種于30％胎牛血清濃度的培養(yǎng)基中后，可產(chǎn)生較多的貼壁細胞，主要表現(xiàn)為破骨樣細胞和間充質(zhì)樣細胞，經(jīng)傳3代后，可得純化擴增的人臍血MSCs。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，人臍血MSCs不表達造血干細胞表

3、面標志的相關(guān)抗原 CD14、淋巴細胞表面標志的相關(guān)抗原 CD19，強表達間充質(zhì)干細胞表面標志的相關(guān)抗原 CD105、CD44。
　　 2.用高濃度胎牛血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的單個核細胞形成的克隆數(shù)與低濃度胎牛血清培養(yǎng)的單個核細胞形成的克隆數(shù)相比差異有顯著意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.來源于人臍血的MSCs在體外可以分離培養(yǎng)、擴增，為人臍血MSCs的進一步研究奠定基礎。
　　 2.30％胎牛血清濃