晚卵泡期孕酮水平對(duì)卵巢中反應(yīng)者子宮內(nèi)膜容受性的影響.pdf

1、目的：
　　通過回顧性分析控制性超排卵（controlled ovarian hyperstimulation,COH）過程中，卵巢不同反應(yīng)患者，晚卵泡期高孕酮對(duì)IVF-ET妊娠結(jié)局的影響，研究卵巢中反應(yīng)患者晚卵泡期高孕酮狀態(tài)下對(duì)子宮內(nèi)膜組織學(xué)、形態(tài)學(xué)及整合素аvβ3、白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor,LIF）、白介素-1（inerleukin-1,IL-1）表達(dá)的影響，采用 RNA-seq技

2、術(shù)分析卵巢中反應(yīng)者高孕酮對(duì)子宮內(nèi)膜基因表達(dá)譜的變化，并用qRT-PCR技術(shù)驗(yàn)證差異基因，分析差異基因的功能，探索COH過程中，晚卵泡期孕酮水平的提早升高對(duì)子宮內(nèi)膜容受性影響的可能機(jī)制，以期對(duì)臨床工作者針對(duì)晚卵泡期孕酮水平升高，做出合理的處理方案及預(yù)防措施提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1、COH中卵巢不同反應(yīng)者晚卵泡期高孕酮對(duì)IVF-ET妊娠結(jié)局的影響
　　回顧性分析2003年1月—2013年12月在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)

3、院生殖醫(yī)學(xué)中心行長方案IVF-ET助孕患者臨床資料，共納入本研究3841個(gè)周期，按照獲卵數(shù)分為卵巢高反應(yīng)組：獲卵數(shù)≥20，842例；卵巢中反應(yīng)組：5<獲卵數(shù)<20，2008例；卵巢低反應(yīng)組：獲卵數(shù)≤5，991例。將總?cè)巳杭安煌殉卜磻?yīng)組患者HCG日血清孕酮水平分為以下8組：≤1.00，1.00-1.25，1.25-1.5，1.5-1.75，1.75-2.00，2.00-2.25，2.25-2.5，>2.5ng/ml。計(jì)算每個(gè)孕酮區(qū)間的臨

4、床妊娠率，以及每個(gè)孕酮區(qū)間組與最低孕酮組（P≤1ng/ml）相比臨床妊娠率的OR值和95％可信區(qū)間，尋找出卵巢高、中、低反應(yīng)組孕酮升高的切點(diǎn)值。以此切點(diǎn)值為界點(diǎn)，比較不同卵巢反應(yīng)人群中孕酮升高組和未升高組的臨床妊娠率、著床率及各項(xiàng)臨床指標(biāo)的差異。并采用logistic回歸分析不同卵巢反應(yīng)人群孕酮水平升高的影響因素。
　　2、COH中晚卵泡期高孕酮對(duì)卵巢中反應(yīng)患者子宮內(nèi)膜組織學(xué)、胞飲突發(fā)育、整合素аvβ3、LIF、IL-1的影響

5、r>　　選取2014年4月—2015年12月在鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心行長方案的IVF-ET助孕患者，所有入選患者均為卵巢中反應(yīng)患者，在本次取卵周期取消移植，并簽署知情同意書。按照HCG日孕酮水平分組：孕酮升高組：n=18， HCG日孕酮≥2.25ng/ml；孕酮未升高組：n=11，HCG日孕酮<2.25ng/ml。取卵后5天采集子宮內(nèi)膜組織，并分為三部分：一部分用無菌生理鹽水漂洗三遍，放入預(yù)先配置的2%戊二醛PBS固定液中；一

6、部分用無菌生理鹽水漂洗后，放入10%中性福爾馬林溶液中；一部分迅速投入液氮中保存?zhèn)溆?。采用HE染色觀察比較兩組子宮內(nèi)膜組織學(xué)變化，掃描電鏡觀察兩組子宮內(nèi)膜胞飲突變化，免疫組化方法及western blot方法檢測兩組子宮內(nèi)膜整合素аvβ3、LIF、IL-1的表達(dá)變化。
　　3、應(yīng)用RNA-seq技術(shù)分析COH中晚卵泡期高孕酮對(duì)卵巢中反應(yīng)者子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)基因表達(dá)譜的變化
　　選取2014年4月—2015年12月在鄭州大學(xué)第

7、二附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心行長方案的IVF-ET助孕患者，所有入選患者均為卵巢中反應(yīng)患者，在本次取卵周期取消移植，并簽署知情同意書。根據(jù)HCG日血清孕酮水平進(jìn)行分組：孕酮升高組：n=6，HCG日孕酮≥2.25ng/ml；孕酮未升高組：n=6，HCG日孕酮<2.25ng/ml。取卵后5天采集子宮內(nèi)膜組織，使用 RNase-free水漂洗后分裝成兩份，迅速投入液氮中保存?zhèn)溆谩２捎?RNA-seq技術(shù)分析兩組子宮內(nèi)膜基因表達(dá)譜的變化，篩選出差異表

8、達(dá)基因，用qRT-PCR方法驗(yàn)證部分差異基因，并分析相關(guān)基因的功能。
　　結(jié)果：
　　1、COH中卵巢不同反應(yīng)者晚卵泡期高孕酮影響IVF-ET妊娠結(jié)局
　　隨著卵巢反應(yīng)性增加，HCG日血清孕酮切點(diǎn)值升高，卵巢高、中、低反應(yīng)組切點(diǎn)值分別為2.5ng/ml、2.25 ng/ml、1.5 ng/ml。隨著孕酮水平升高，卵巢不同反應(yīng)組的臨床妊娠率和胚胎種植率均明顯下降（P<0.05），但受精率、卵裂率及優(yōu)質(zhì)胚胎率無明顯差異（P

9、>0.05）。通過logistic回歸分析，提示不同卵巢反應(yīng)人群中獲卵數(shù)、促性腺激素（gonadotropin,Gn)用量均與孕酮水平升高成正相關(guān)（P<0.05）。
　　2、COH中晚卵泡期高孕酮使卵巢中反應(yīng)者子宮內(nèi)膜分泌期、胞飲突發(fā)育提前，降低整合素аvβ3、LIF、IL-1的表達(dá)
　　高孕酮組分泌中期的子宮內(nèi)膜的比例高于孕酮未升高組（P<0.05）；高孕酮組子宮內(nèi)膜胞飲突出現(xiàn)皺縮，孕酮未升高組胞飲突呈發(fā)育中、發(fā)育成熟狀態(tài)

10、；高孕酮組子宮內(nèi)膜中整合素аvβ3（0.212±0.05 vs0.47±0.032）、LIF（0.137±0.027 vs0.531±0.056）、IL-1（0.264±0.018 vs0.515±0.023）蛋白表達(dá)量均低于孕酮未升高組（P<0.05）。
　　3、RNA-seq技術(shù)分析晚卵泡期高孕酮影響了卵巢中反應(yīng)者子宮內(nèi)膜容受性相關(guān)基因的表達(dá)：
　　高孕酮組和孕酮未升高組共有31個(gè)顯著性差異基因，其中上調(diào)基因15個(gè)基因，

11、下調(diào)基因16個(gè)。采用qRT-PCR驗(yàn)證部分差異表達(dá)基因，其中SLC7A4、DDX5、IFI6、HLA-DRB4、HLA-DRB5、SCGB1D2與 RNA-seq結(jié)果一致，它們的變化可能與晚卵泡期孕酮提早升高影響子宮內(nèi)膜容受性有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、HCG日孕酮水平的提早升高不影響卵子及胚胎質(zhì)量，可能通過影響子宮內(nèi)膜容受性，從而降低了IVF-ET的臨床妊娠率及著床率；隨著卵巢反應(yīng)性增加， HCG日孕酮閾值水平升高；Gn用