毛蕊異黃酮對結(jié)直腸癌細(xì)胞株HCT116增殖凋亡的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、背景:目前研究表明，使用雌激素替代療法(estrogen replacementtreatment，ERT)的圍絕經(jīng)期婦女結(jié)直腸癌發(fā)病率明顯降低。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，雌激素及其受體有抑制結(jié)直腸癌的作用，但是使用雌激素療法會(huì)增加靜脈血栓、乳腺癌和子宮內(nèi)膜癌等的發(fā)生率。而植物雌激素是一類由大豆、葛根和黃芪等多種植物中提取的具有雌激素樣作用的化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌激素相似，可以與細(xì)胞雌激素受體(estrogen receptor，ER)結(jié)合起部分

2、雌激素樣效應(yīng)或抗雌激素效應(yīng)，且其來源豐富、毒副作用低。因此，植物雌激素在抗腫瘤方面的作用和價(jià)值逐漸引起了人們的重視。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，大豆中含有豐富的植物雌激素，食用豆制品可以減少人類患結(jié)直腸癌、前列腺癌和乳腺癌等腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明，植物雌激素可以通過競爭性結(jié)合雌激素受體或抑制酪氨酸激酶活性等作用，從而減低結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌、宮頸癌等多種腫瘤細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)凋亡。
　　黃芪為豆科黃芪屬植物，是在我國廣泛應(yīng)用的傳統(tǒng)中藥

3、。其有效成分以多糖、三萜、黃酮為主，能在細(xì)胞中引起廣泛的生物學(xué)效應(yīng)，在抗炎、抗病毒、抗突變、抗腫瘤等方面具有重要作用。毛蕊異黃酮作為黃芪提取物最主要的活性成分之一，具有抗氧化、護(hù)肝和抗腫瘤作用，研究發(fā)現(xiàn)毛蕊異黃酮可以與ER受體結(jié)合，抑制肺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和侵襲，抑制乳腺癌、卵巢癌、黑色素瘤的增殖并誘導(dǎo)凋亡，但其在結(jié)腸癌細(xì)胞中的作用及機(jī)理尚未見報(bào)道。
　　目的:本研究主要是通過體外實(shí)驗(yàn)研究毛蕊異黃酮是否通過ERβ介導(dǎo)的EGFR/PI3K

4、-AKT或EGFR/MAPKs通路抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)其凋亡，并探索毛蕊異黃酮的抗腫瘤機(jī)制。
　　方法:選用結(jié)腸癌HCT116和HT29細(xì)胞株為研究對象，在結(jié)腸癌細(xì)胞株的培養(yǎng)基中加入不同濃度的毛蕊異黃酮，采用MTT法檢測毛蕊異黃酮對細(xì)胞增殖的影響。Hoechest33258細(xì)胞核熒光染色法和流式細(xì)胞儀檢測毛蕊異黃酮作用后結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡情況，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測ERβ、EGFR和caspase3的mRNA表達(dá)水平，Weste

5、rn blot測定EGFR、MAPKs(ERK1/2/p-ERK1/2，JNK/P-JNK，P38/P-P38)、AKT/P-AKT、Bax/Bcl-2、Caspase-3、cleaved-Caspase3的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果: MTT結(jié)果顯示毛蕊異黃酮能有效抑制結(jié)腸癌HCT116和HT29細(xì)胞的生長，且呈濃度和時(shí)間依賴性，Hoechest33258和流式細(xì)胞儀檢測的結(jié)果顯示毛蕊異黃酮能通過誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡來抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長

6、。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測結(jié)果顯示在HCT116細(xì)胞中ERβ和Caspase-3 mRNA水平隨毛蕊異黃酮濃度的升高而上調(diào)，EGFRmRNA水平隨毛蕊異黃酮濃度升高而降低。Western blot結(jié)果顯示EGFR、Bcl-2隨毛蕊異黃酮濃度的增大而表達(dá)下調(diào)，而Jnk磷酸化升高，Akt隨毛蕊異黃酮濃度的增大其磷酸化下調(diào)，而Bax、Caspase-3、cleaved-Caspase3等凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)隨毛蕊異黃酮濃度的增加而表達(dá)上調(diào)。