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文檔簡介
1、目的:
通過對小鼠糞便微生物菌群的研究,探索使用糞便微生物移植(FMT)來治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的新方法。潰瘍性結(jié)腸炎病人心肌梗死和中風等心血管事件發(fā)生增加,但卻伴隨著機體總膽固醇和低密度脂蛋白水平的降低。初步探討小鼠巨噬細胞膽固醇外流率的研究方法及其如何受到細胞外膽固醇濃度和LPS的影響。
方法:
1將BALB/c和C57BL/6J小鼠分組,采用葡聚糖硫酸鈉(DSS)進行UC造模,觀察體重的變化,接著對
2、兩個品系的小鼠進行 FMT。取 BALB/c結(jié)腸進行組織學觀察,qPCR檢測小鼠結(jié)腸內(nèi)菌群數(shù)量變化和炎癥因子的表達水平。
2探討B(tài)ODIPY-cholesterol標記細胞,測量膽固醇外流率的方法。優(yōu)化標記時間和孵育時間;分別采用膽固醇、LPS、異常高膽固醇人血清和正常膽固醇人血清處理細胞,再對其膽固醇外流率進行測定和比較。
結(jié)果:
1、經(jīng)過DSS造模后,BALB/c和C57BL/6J小鼠的體重下降,兩個品
3、系小鼠體重的降低在第4天出現(xiàn)顯著性差異。FMT治療后BALB/c小鼠的DAI指數(shù)降低,而C57BL/6J小鼠的DAI指數(shù)逐漸升高。對BALB/c小鼠結(jié)腸進行組織病理學研究,發(fā)現(xiàn)DSS造模后的小鼠結(jié)腸黏膜發(fā)生潰瘍,結(jié)腸隱窩變淺和部分破壞并伴隨炎癥細胞的浸潤。經(jīng)過FMT治療后BALB/c小鼠的結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)與正常小鼠相似。DSS造模后小鼠結(jié)腸中乳桿菌、大腸桿菌、擬桿菌的數(shù)量均顯著增加(P<0.01),雙歧桿菌的數(shù)量顯著降低(P<0.01)。造
4、模后治療組的乳桿菌和大腸桿菌的數(shù)量顯著降低(P<0.01),而雙歧桿菌和擬桿菌的數(shù)量顯著增加(P<0.01)。治療后進一步經(jīng)過恢復期后大腸桿菌的數(shù)量顯著降低(P<0.01),而乳桿菌、雙歧桿菌和擬桿菌的數(shù)量沒有顯著變化(P>0.05)。造模后IL-6、IL-1、IL-10、IFN-γ、IL-12表達水平較對照組增加,其中IL-6、IL-1(P<0.05)、IFN-γ(P<0.01)表達有顯著差異。FMT治療組IL-1、IFN-γ表達水平
5、顯著降低(P<0.01)。在治療停止5天后,所有檢測的細胞因子水平與對照組沒有顯著差異(P>0.05)。
2、BODIPY-膽固醇標記RAW264.7小鼠巨噬細胞2-8h后,測定膽固醇外流率,發(fā)現(xiàn)其隨外加膽固醇濃度(0.1mM、0.5mM、2.5mM)的增大呈遞減趨勢(P<0.01)。LPS刺激后細胞的膽固醇外流率降低(P<0.05)。采用高膽固醇人血清處理細胞后,膽固醇的外流率降低(P<0.05)。
結(jié)論:FMT對
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