旋覆花中倍半萜內(nèi)酯類成分的抗炎作用及其機(jī)制研究.pdf

1、哮喘作為一類異質(zhì)性疾病，在通常情況下其特征表現(xiàn)為慢性氣道炎癥。哮喘的發(fā)作過程是一種可能由多種炎癥細(xì)胞如肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞（嗜酸、嗜堿、中性）等和細(xì)胞組分共同參與的復(fù)雜過程。旋覆花作為一種傳統(tǒng)的中草藥，應(yīng)用歷史悠久?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，旋覆花具有抗癌、保肝、抗糖尿病等多樣的藥理作用。在前期工作中，本課題組從旋覆花中分離并鑒定了38個單體化合物，并進(jìn)行了抗炎活性篩選。通過初篩，本文選取具有抑制一氧化氮（ NO）活性較強(qiáng)的倍半萜內(nèi)酯類

2、化合物6α-isovaleryloxy-1-hydroxy-4αH-1,10-secoeudesma-5(10),1(13)-dien-12,8β-olide（ IVSE）和具有抑制白三烯C4（LTC4）、抑制骨髓源性肥大細(xì)胞（BMMC）脫顆粒和抑制信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子6（STAT6）活性的多重抗炎作用的倍半萜內(nèi)酯類化合物1,6-二乙酰基大花旋覆花內(nèi)酯（1,6-O,O-diacetylbritannilactone，ABLOO）進(jìn)行其

3、抗炎作用及機(jī)制研究。
　　本文第一部分研究IVSE對脂多糖誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞NO生成的抑制作用及機(jī)制；第二部分：①在BMMC細(xì)胞中，考察ABLOO對免疫球蛋白E（IgE）/二硝基苯基化人血清白蛋白（DNP-HSA）誘導(dǎo)BMMC細(xì)胞生成LTC4和脫顆粒的抑制作用及其機(jī)制；②在肺癌上皮細(xì)胞 A549中，考察 ABLOO對白細(xì)胞介素4（IL-4）誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子-1（eotaxin-1）和花生四烯酸脂氧合酶15（ALO

4、X15）表達(dá)的影響及其機(jī)制。
　　第一部分結(jié)果表明：IVSE顯著抑制NO的產(chǎn)生，其半數(shù)抑制濃度（IC50）為2.20μM，并顯著抑制iNOS的蛋白表達(dá)。IVSE顯著下調(diào)IκB激酶α/β（IKKα/β）的磷酸化水平、抑制核因子κB抑制蛋白（IκB）的磷酸化及降解，繼而抑制了核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）p65的核轉(zhuǎn)移。IVSE進(jìn)一步抑制絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路的胞外信號調(diào)節(jié)激酶1/2（ERK1/2）、c-Jun氨基末端激酶

5、（JNK）和p38 MAPK的磷酸化。上述結(jié)果表明，IVSE抑制LPS誘導(dǎo)NO生成和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）表達(dá)的作用是通過抑制NF-κB的活性和下調(diào)MAPKs磷酸化水平而實現(xiàn)的。另外，IVSE對基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）的活性也具有確切的抑制作用。第二部分結(jié)果表明：①ABLOO顯著抑制激活的BMMC細(xì)胞LTC4的產(chǎn)生（IC50為5.5μM）及其脫顆粒（IC50為10.5μM），其抗炎作用是通過下調(diào)胞漿型磷脂酶A2（cPLA

6、2）和磷酯酶Cγ（PLCγ）的磷酸化水平而實現(xiàn)的。②ABLOO有效抑制IL-4誘導(dǎo)的eotaxin-1和ALOX15 mRNA表達(dá)，且呈劑量依賴性。作用機(jī)制研究表明，ABLOO下調(diào)STAT6的磷酸化水平和抑制其轉(zhuǎn)錄活性，并且下調(diào)STAT6上游JAK3的磷酸化水平。因此，ABLOO對IL-4誘導(dǎo)A549細(xì)胞eotaxin-1和ALOX15 mRNA表達(dá)的抑制作用是通過抑制Janus激酶3（JAK3）和STAT6的磷酸化及降低STAT6的轉(zhuǎn)