eNOS、EPO、TNF-α基因多態(tài)性與青海省漢族妊娠高血壓疾病相關(guān)性研究.pdf

1、目的：通過研究內(nèi)皮型一氧化氮合酶（ endothelial nitricoxide synthase, eNOS）基因G894T、促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin, EPO）基因T3541G、腫瘤壞死因子-α（tumour necrosises factor-alpha, TNF-α）基因G308A等多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率在青海省漢族妊娠高血壓疾病（ pregnancy-induced hypertension syndrom

2、, PIH）患者和正常孕婦之間分布的差異性，檢測兩組血漿中EPO、TNF-α含量，比較兩組血液中eNOS mRNA相對表達(dá)差異性，探討eNOS基因G894T、EPO基因T3541G、TNF-α基因G308A多態(tài)性與妊娠高血壓疾病的關(guān)聯(lián)性，為青海地區(qū)妊娠高血壓疾病的預(yù)防提供依據(jù)。
　　方法：收集青海省各大醫(yī)院漢族人群中妊娠高血壓患者和正常孕婦外周血標(biāo)本和臨床資料，提取基因組DNA，采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（polymer

3、ase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP）方法分別擴(kuò)增eNOS SNP/G894T、EPO SNP/T3541G、TNF-αSNP/G308A等多態(tài)性位點(diǎn)，采用特異性酶對eNOS基因G894T、EPO基因 T3541G、TNF-α基因G308A進(jìn)行多態(tài)性分型。分別對不同基因型的目的片段測序，將測序結(jié)果在美國國立生物技術(shù)信息中心（nation

4、al center for biotechnology information, NCBI）數(shù)據(jù)庫中比對，確保擴(kuò)增產(chǎn)物真實可靠，并對酶切結(jié)果加以驗證；使用酶聯(lián)免疫吸附測定法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）檢測血漿中EPO、TNF-α含量；使用半定量反轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)（ semi-quantitative reverse transcription and polymerase Cha

5、in reaction, SqRT-PCR）方法分析血液中eNOS基因 mRNA表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1. eNOS基因 GG、GT、TT基因型頻率在PIH組分別為17.4％、82.6%、0%，對照組分別為0%、95.6%、4.4%，兩組比較存在差異性（P＜0.05）。PIH組G、T等位基因頻率分別為58.7%、41.3%，對照組分別為47.8%、52.2%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），PIH組G等位基因

6、頻率高于對照組。PIH組比對照組（OR=1.553，95% CI為1.107～2.178），G等位基因為PIH的易感基因（OR=1.229，95%CI為1.048～1.441）。
　　2. EPO基因TT、TG、GG基因型頻率在PIH組分別為9.7%、74.2%、6.1%，對照組分別為42.9%、46.4%、10.7%，兩組比較有差異（P＜0.05）。PIH組野生純合型（TT）頻率明顯低于對照組，突變型（TG、GG）基因型頻率高于

7、對照組。PIH組等位基因T、G頻率分別為46.8.%，53.2%，對照組分別為66.1%、33.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），PIH組T等位基因頻率低于對照組，G基因頻率明顯高于對照組，PIH比對照組（OR=0.451，95%CI為0.311～0.655），G等位基因為妊高征的危險因素（OR=1.569，95%CI為1.263～1.949）。
　　3. TNF-α基因GG、GA、AA基因型頻率在PIH組中分別為1

8、8.18%、72.73%、9.09%，對照組為42.86%、52.38%、4.76%，兩組比較有顯著差異性（P＜0.01）。PIH組突變型（GA+AA）基因型頻率（81.82%）明顯高于對照組（57.14%）。PIH組G等位基因頻率（54.55%）低于對照組（69.05%），A等位基因頻率（45.45%）高于對照組（33.95%），（P＜0.01）。PIH組比對照組（OR=0.538，95% CI：0.375~0.771），A等位基因為

9、PIH的易感基因（OR=1.469，95%CI：1.170~1.843）
　　4. PIH組血漿中EPO含量為（454.113±35.097）pg/mL，對照組為（396.316±50.262）pg/mL，PIH組明顯高于對照組（P＜0.01）。
　　5. TNF-α含量在PIH組血漿中為（21.976±17.570）pg/mL，對照組為（27.797±14.730）pg/mL兩組比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

10、　　6. PIH組eNOS mRNA表達(dá)相對強(qiáng)度為（1.007±0.155），對照組為（1.243±0.329），PIH組低于對照組（P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. eNOS SNP/G894T、EPO SNP/T3541G、TNF-αSNP/G308A多態(tài)性與青海省漢族妊娠高血壓疾病相關(guān)， eNOS SNP/G894T位點(diǎn) G等位基因、EPO SNP/T3541G位點(diǎn)G等位基因、TNF-αSNP/G308A位點(diǎn)A等