口腔鱗狀細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移新型分子標(biāo)記物的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：基于蛋白質(zhì)組學(xué)研究探索口腔鱗狀細(xì)胞癌預(yù)測(cè)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的新型分子標(biāo)記物。
　　方法：⑴差異蛋白篩選實(shí)驗(yàn)方法：選取新鮮冰凍口腔癌組織20例，分淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性12例和陰性8例，隨機(jī)分組配對(duì)，采用二維雙向電泳技術(shù)（2-DE），分離兩組表達(dá)差異蛋白質(zhì)位點(diǎn)，基質(zhì)輔助激光解吸電離串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-TOF MS）鑒定差異蛋白質(zhì)，并用Mascot數(shù)據(jù)庫檢索篩選出與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白質(zhì)。⑵采用免疫組化檢測(cè)方法對(duì)104例福爾馬林

2、固定石蠟包埋的口腔鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本，其中淋巴結(jié)移組61例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組43例，檢測(cè)差異表達(dá)上調(diào)蛋白谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶P(GSTP),14-3-3η蛋白(14-3-3 eta protein),下調(diào)蛋白磷酸甘油酸酯激酶1（Phosphoglycerate kinase-1，PGK1）在口腔癌組織中的表達(dá)水平以及臨床病理參數(shù)間的關(guān)系。⑶western blot方法檢測(cè)8例新鮮冰凍口腔癌組織中上述蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：①差異蛋白

3、篩選實(shí)驗(yàn)采用雙向凝膠電泳技術(shù)，共獲得126個(gè)差異蛋白點(diǎn)，進(jìn)行MADLDI-TOF-TOF MS鑒定，及Mascot數(shù)據(jù)庫檢索篩選出與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白42個(gè)，上調(diào)蛋白28個(gè)；下調(diào)蛋白為14個(gè)。②從差異蛋白質(zhì)中篩選出2個(gè)上調(diào)和1個(gè)下調(diào)蛋白：GSTP、14-3-3 eta protein和 PGK1對(duì)其在組織水平進(jìn)行驗(yàn)證。這些蛋白參與多種信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化、凋亡、轉(zhuǎn)錄、粘附、血管形成、能量代謝等。③通過免疫組化檢測(cè)方法對(duì)104例口腔

4、鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)行檢測(cè)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組上調(diào)蛋白GSTP、14-3-3 eta和下調(diào)蛋白PGK1在口腔癌中表達(dá)的陽性率分別為50％（52/104），50.96%（53/104）,44.23%(46/104)；GSTP在口腔癌臨床分期與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在臨床病理參數(shù)年齡、腫瘤細(xì)胞分化程度中差異比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），推測(cè)GSTP與口腔鱗狀細(xì)胞癌的進(jìn)展（臨床分期）和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，有望成為預(yù)測(cè)口腔癌淋

5、巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物。14-3-3 eta與PGK1在口腔癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)（性別、年齡、臨床分期、細(xì)胞分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）間比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；14-3-3 eta蛋白在口腔癌高分化組和中低分化組的陽性率分別為59.26%（16/27）、48.05%(37/77)，臨床分期Ⅰ+Ⅱ期組和Ⅲ+Ⅳ組的陽性率分別為61.76%（21/34）、45.71%（32/70），淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性與陽性組的陽性率分別為60.4

6、6%（26/43），44.26%（27/61）。各組間的表達(dá)陽性率對(duì)比來看，14-3-3 eta蛋白在口腔癌中低分化組，臨床分期Ⅲ+Ⅳ組，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中出現(xiàn)表達(dá)下調(diào)趨勢(shì)。由此推測(cè)其在口腔癌發(fā)生、發(fā)展中具有一定作用。④8例新鮮冰凍口腔癌組織進(jìn)行western blot檢測(cè)結(jié)果顯示在上調(diào)蛋白14-3-3 eta和下調(diào)蛋白PGk1在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性與陰性組中的表達(dá)差異不明顯，GSTP在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中表達(dá)有升高趨勢(shì)。
　　結(jié)論：⑴應(yīng)

7、用2-DIGE結(jié)合MALDI-TOF-TOF MS以及通過Mascot數(shù)據(jù)庫檢索鑒定，對(duì)OSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組和陰性組間的表達(dá)差異蛋白進(jìn)行分析，共獲得126個(gè)表達(dá)差異蛋白位點(diǎn)，篩選出與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白42個(gè)，上調(diào)蛋白28個(gè)，下調(diào)蛋白14個(gè)，這些蛋白質(zhì)參與多種信號(hào)通路調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的翻譯、合成、加工以及細(xì)胞自身增殖、分化、凋亡、粘附及血管形成等。⑵通過差異蛋白驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)GS TP在口腔癌中異常表達(dá)，與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

8、移呈正相關(guān)，有望成為預(yù)測(cè)口腔癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)記物。14-3-3 eta在口腔癌中腫瘤細(xì)胞中低分化組、臨床Ⅲ+Ⅳ期組和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性組中表達(dá)有下調(diào)降低趨勢(shì)，其在腫瘤細(xì)胞分化、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移中可能起一定作用。⑶口腔癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是一個(gè)多步驟、多因素及各種細(xì)胞功能異常所導(dǎo)致的復(fù)雜病理的過程，這些差異蛋白質(zhì)(42個(gè)表達(dá)差異蛋白)可以從蛋白質(zhì)通路以及蛋白互作關(guān)系的角度篩選更敏感的蛋白，制作蛋白質(zhì)芯片，引用于臨床，對(duì)口腔癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)具有重要意