中國(guó)西南地區(qū)庫(kù)蠓屬昆蟲（雙翅目：蠓科）的分類研究.pdf

1、目的：通過(guò)對(duì)中國(guó)西南地區(qū)庫(kù)蠓種類分布調(diào)查與整理，豐富西南地區(qū)庫(kù)蠓物種多樣性；PCR擴(kuò)增庫(kù)蠓的線粒體DNA CO I和Cytb序列，結(jié)合形態(tài)學(xué)分類對(duì)其進(jìn)行種類鑒別和系統(tǒng)發(fā)育分析，為實(shí)現(xiàn)吸血蠓快速、準(zhǔn)確鑒定奠定基礎(chǔ)。
　　方法：⑴采用網(wǎng)掃法、馬氏網(wǎng)采集法和燈誘法進(jìn)行庫(kù)蠓昆蟲采集，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)制作永久玻片標(biāo)本，顯微鏡下根據(jù)形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行庫(kù)蠓種類的鑒定，整理中國(guó)西南地區(qū)（四川、重慶、貴州、云南）庫(kù)蠓名錄。⑵取待試庫(kù)蠓進(jìn)行DNA的提取，PCR擴(kuò)

2、增線粒體DNA CO I和Cytb基因的目的片段。序列經(jīng)測(cè)定、校對(duì)、比對(duì)等分析后，選擇鄰接法（NJ）、最大似然法（ML）或最大簡(jiǎn)約法（MP）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。
　　結(jié)果：①整理中國(guó)西南地區(qū)庫(kù)蠓屬10亞屬129種，其中3種無(wú)法歸為任一亞屬，四川分布63種，重慶分布22種，貴州分布41種，云南分布89種，上述地區(qū)新紀(jì)錄17種。②PCR擴(kuò)增得到庫(kù)蠓約650 bp的CO I序列、約500bp的Cytb序列，線粒體DNA CO I和Cytb序

3、列的A+T含量（66.7/79.7）都遠(yuǎn)高于C+G含量（33.3/20.3）；CO I序列通過(guò) BLAST與 Genbank中已上傳庫(kù)蠓序列相似度很高，種類匹配成功；CO I和Cytb序列同種類不同地理種群、個(gè)體的序列比對(duì)相似度高，與形態(tài)鑒定結(jié)果一致；CO I和Cytb序列的遺傳距離經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，表明CO I序列的種內(nèi)遺傳距離分別與種間、亞屬間、屬間遺傳距離具差異；Cytb序列的種內(nèi)、種間、亞屬間、屬間遺傳距離均有差異；基于CO I基因

4、對(duì)庫(kù)蠓6個(gè)亞屬代表種及形態(tài)相似的近緣種構(gòu)建的NJ樹、ML樹和MP樹，基于Cytb基因構(gòu)建12種庫(kù)蠓的NJ和MP分子系統(tǒng)樹，都得到和形態(tài)學(xué)鑒定一致的結(jié)果，很好區(qū)分庫(kù)蠓不同種類（包括近緣種），庫(kù)蠓不同亞屬各自構(gòu)成一個(gè)單系群，不同種類各自形成一個(gè)單系，無(wú)種類交叉，同種類不同地理種群聚為一支，結(jié)合形態(tài)特征進(jìn)一步明確親緣關(guān)系。
　　結(jié)論：⑴豐富西南地區(qū)庫(kù)蠓物種多樣性，完善西南地區(qū)庫(kù)蠓地理區(qū)劃，為上述地區(qū)研究蠓傳疾病的發(fā)生、防治及野外防治蠓害