白紋伊蚊感染寨卡病毒和登革病毒的媒介能力研究.pdf

1、背景:
　　寨卡病毒(zika virus，ZIKV)和登革病毒(dengue virus，DENV)是近年來流行較廣的蚊媒病毒，可致小頭癥、格林-巴利綜合征、登革出血熱和登革休克綜合征等嚴重危害。了解中國能傳播ZIKV的蚊媒，明確溫度對白紋伊蚊傳播DENV-2的媒介能力的影響，對蚊媒疾病的防控具有指導(dǎo)意義。
　　目的:
　　建立ZIKV和DENV-2感染的細胞和蚊蟲模型，明確中國埃及伊蚊、白紋伊蚊和致倦庫蚊感染ZIK

2、V的媒介能力;對比不同溫度下白紋伊蚊感染DENV-2的媒介能力差異。
　　方法:
　　qRT-PCR對比Vero、C6/36、Aag2細胞和乳鼠富集ZIKV的效果;間接免疫熒光確定ZIKV的位置;病毒全細胞懸液、上清液和細胞裂解后的上清液分別與羊血混合喂食白紋伊蚊，確定ZIKV的收集方式;根據(jù)最佳條件感染白紋伊蚊，RT-PCR和qRT-PCR檢測蚊蟲感染ZIKV情況。埃及伊蚊、白紋伊蚊和致倦庫蚊感染ZIKV，于感染后0d、4

3、d、7d、10d和14d檢測整只蚊蟲的ZIKV感染情況和病毒量;另外感染一批蚊蟲，于上述各時間點解剖蚊蟲中腸、頭、唾液腺和卵巢，檢測各組織的感染情況和病毒量。C6/36細胞感染DENV-2，觀察細胞病變效應(yīng);RT-PCR、TCID50和間接免疫熒光檢測DENV-2及其滴度;新鮮的病毒上清液與羊血混合喂食白紋伊蚊，RT-PCR檢測蚊蟲攜帶DENV-2的情況。吸食DENV-2血餐的白紋伊蚊置于18℃、23℃、28℃和32℃飼養(yǎng)，于感染后0d

4、、5d、10d和15d檢測白紋伊蚊中腸、卵巢和唾液腺的DENV-2和病毒量;免疫組化觀察32℃、15d的蚊蟲中腸和唾液腺。
　　結(jié)果:
　　C6/36細胞感染ZIKV于28℃、5d的病毒滴度最高;全細胞病毒懸液與羊血混合喂食白紋伊蚊效果最佳;白紋伊蚊感染ZIKV的陽性率為27.27％～30.77％，且病毒滴度逐漸增高。埃及伊蚊和白紋伊蚊在感染后各時間點保持較高的感染率且病毒滴度逐漸升高，致倦庫蚊僅在4d和7d檢測到少量的感染

5、和極低的病毒量，7d后未檢測到感染;ZIKV在感染后4d可在埃及伊蚊唾液腺檢測到病毒，在白紋伊蚊則需要10d。C6/36細胞感染DENV-2置于37℃，2d則出現(xiàn)空泡化，RT-PCR、TCID50和間接免疫熒光證實細胞感染成功;喂食白紋伊蚊，有不同程度的蚊蟲感染DENV-2。18℃，DENV-2僅在中腸內(nèi)緩慢增殖，不能播散至唾液腺。18℃～32℃，隨著溫度的升高，其播散至卵巢和唾液腺的時間越短，23℃和28℃需要10d，而32℃，5d侵

6、入唾液腺。免疫組化可觀察到中腸和唾液腺內(nèi)的病毒抗原。
　　結(jié)論:
　　C6/36細胞為富集ZIKV和DENV-2的理想細胞，兩種病毒均能成功感染白紋伊蚊。中國分布的埃及伊蚊和白紋伊蚊可傳播ZIKV，而致倦庫蚊不能作為ZIKV的傳播媒介。白紋伊蚊的媒介能力較埃及伊蚊差，但其在中國廣泛分布，白紋伊蚊可能成為中國傳播ZIKV的主要媒介。溫度是影響白紋伊蚊感染DENV-2媒介能力的重要因素，18℃～32℃，溫度越高，病毒在白紋伊蚊增