鼠尾藻和羽藻的提取物對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用的研究.pdf

1、黃嘌呤氧化酶（EC：1.2.3.2）是一種專(zhuān)一性不高的酶，能催化次黃嘌呤向黃嘌呤以及黃嘌呤向尿酸的轉(zhuǎn)化。黃嘌呤氧化酶參與嘌呤代謝，是尿酸生成的關(guān)鍵酶。而尿酸在體內(nèi)含量過(guò)高會(huì)引起高尿酸血癥，進(jìn)而引發(fā)痛風(fēng)、心血管疾病以及腎功能不全。研究表明，高尿酸血癥的發(fā)病原因多數(shù)是由于黃嘌呤氧化酶的異常，從而造成尿酸在體內(nèi)的大量積累、沉積。近年來(lái)，治療高尿酸血癥的臨床用藥多有嚴(yán)重副作用。因此，從天然海藻中提取具有高效抑制活性的黃嘌呤氧化酶抑制劑是目前一個(gè)

2、新的研究熱點(diǎn)。
　　本實(shí)驗(yàn)選取了夏季青島海邊最常見(jiàn)的兩種海藻——鼠尾藻和羽藻作為實(shí)驗(yàn)材料，進(jìn)行黃嘌呤氧化酶抑制作用的研究。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定了這兩種海藻水溶性組分的最佳提取條件；采用有機(jī)溶劑萃取分離出海藻的各個(gè)組分，通過(guò)動(dòng)力學(xué)方法分析了各個(gè)組分對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用類(lèi)型和機(jī)理；測(cè)定了兩種海藻水溶性組分分別與臨床用藥別嘌呤醇的聯(lián)合作用類(lèi)型；確定了二者水溶性組分的抗氧化能力。相關(guān)研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下：
　　1．確定了鼠尾藻和羽藻的

3、水溶性組分的最佳提取條件。反應(yīng)體系為5mL，底物黃嘌呤含量為0.24mmol/L，磷酸緩沖液pH值為6.8，黃嘌呤氧化酶液的終濃度為4μg/mL，反應(yīng)溫度為25℃，反應(yīng)時(shí)間為1min。首先對(duì)鼠尾藻和羽藻通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)確定單個(gè)浸提條件的最佳值，然后利用正交實(shí)驗(yàn)確定出最佳的浸提條件組合。鼠尾藻水溶性組分最佳浸提條件為：浸提溫度為40℃，浸提時(shí)間7h，浸提液乙醇濃度70％，超聲破碎時(shí)間5min；羽藻水溶性組分的最佳條件組合：浸提溫度為45℃，

4、浸提時(shí)間為4h，浸提液乙醇濃度為70％，超聲破碎時(shí)間為5min。
　　2．確定了兩種海藻的各個(gè)組分對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制機(jī)理和抑制類(lèi)型。研究鼠尾藻乙酸乙酯組分、水溶性組分、多糖對(duì)酶的抑制作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鼠尾藻乙酸乙酯組分對(duì)XO無(wú)抑制作用，其水溶性組分對(duì)XO的抑制類(lèi)型為反競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制，抑制常數(shù)為Ki=0.11，IC50=0.42mg/mL；多糖對(duì)XO的抑制類(lèi)型為競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制，抑制常數(shù)為Ki=1.41，IC50=0.69mg/m

5、L.研究羽藻的水溶性組分和乙酸乙酯組分對(duì)酶的抑制作用.結(jié)果表明，二者對(duì)黃嘌呤氧化酶均有抑制作用，水溶性組分對(duì)XO的抑制類(lèi)型為非競(jìng)爭(zhēng)性可逆抑制，抑制常數(shù)為Ki=1.46，IC50=0.31mg/mL；乙酸乙酯組分對(duì)XO的抑制類(lèi)型表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)性抑制類(lèi)型，抑制常數(shù)Ki=0.16，IC50=0.61mg/mL。鼠尾藻和羽藻都是水溶性組分對(duì)XO抑制活性最高。
　　3．測(cè)定了兩種海藻的水溶性組分分別和別嘌呤醇的聯(lián)合抑制類(lèi)型。別嘌呤醇為痛風(fēng)的臨床

6、治療藥物，測(cè)定鼠尾藻和羽藻的水溶性組分分別與別嘌呤醇對(duì)XO的聯(lián)合抑制類(lèi)型。結(jié)果表明，鼠尾藻水溶性組分與別嘌呤醇混合后的共毒系數(shù)是3.8，屬于相加作用；羽藻水溶性組分與別嘌呤醇混合后的共毒系數(shù)是-3.2，屬于相加作用。
　　4.測(cè)定二者水溶性組分的抗氧化作用。測(cè)定兩種海藻對(duì)·OH和O?2·的清除作用。分別得到，鼠尾藻水溶性組分的各個(gè)濃度對(duì)·OH的清除率均在50％以上，并且隨著抑制劑濃度的升高，清除率隨之增加；不同濃度的鼠尾藻水溶性組