中藥血必凈對燙傷大鼠血管內(nèi)皮屏障的保護(hù)作用與機(jī)制研究.pdf

1、大面積燒傷后微血管通透性增高導(dǎo)致大量血漿成分滲出，有效循環(huán)血量銳減，如缺乏及時(shí)有效的液體復(fù)蘇，常導(dǎo)致休克發(fā)生。液體復(fù)蘇雖可糾正低血容量狀態(tài)，但燒傷后微血管通透性持續(xù)升高，重癥燒傷患者常處在“邊補(bǔ)邊漏”的困境中，大量液體經(jīng)由受損的血管內(nèi)皮屏障進(jìn)入組織間隙，而使組織水腫、器官功能障礙加重。因而，保護(hù)血管內(nèi)皮屏障功能對于燒傷救治研究具有重要意義。缺氧與炎癥損傷時(shí)燒傷后血管內(nèi)皮屏障損傷的始動因子。血必凈注射液廣泛應(yīng)用于燒傷、膿毒癥、全身炎癥反應(yīng)

2、綜合征等疾病的治療當(dāng)中。既往研究顯示血必凈可降低燒傷患者炎癥因子水平，部分恢復(fù)微血管收縮與舒張功能，但血必凈對血管內(nèi)皮屏障功能的影響尚缺乏研究。
　　目的：
　　1.研究血必凈對燒傷后血管內(nèi)皮屏障結(jié)構(gòu)損傷、功能損害的保護(hù)作用;
　　2.探討血必凈作用機(jī)制是否與減輕燒傷后缺氧與炎癥損傷有關(guān)，為其用于燒傷休克治療，特別是無靜脈補(bǔ)液條件下早期救治研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.血必凈對燒傷后血管內(nèi)皮屏障的

3、保護(hù)作用
　　建立50％TBSAⅢ度燙傷大鼠模型，并隨機(jī)分為4組:①假燙+生理鹽水組（Sham+NS）;②假燙+血必凈組(Sham+XBJ);③燙傷+生理鹽水組(Scald+NS);④燙傷+血必凈組(Scald+XBJ)，于傷后10min內(nèi)，腹腔注射4ml/kg血必凈注射液(②④組)或等量生理鹽水(①③)，并于傷后2h、6h取材檢測肺微血管通透性（伊文斯蘭法）、組織含水率（干濕重法）、病理損傷評估（HE染色、Gloor評分）、VE

4、-cadherin、ZO-1(Western blot)及Syndecan-1水平（免疫熒光）變化。此外，采用Kaplan-Meier分析評價(jià)血必凈對燙傷大鼠生存率的影響。
　　原代培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(RPMEC)，通過燙傷大鼠血清刺激模擬燒傷后血管內(nèi)皮屏障損傷?？缒る娮璺?TER)評價(jià)RPMEC單層通透性變化。RPMEC隨機(jī)分為4組:①10％/20％假燙血清刺激組;②10％/20％燙傷血清刺激組;③10％/20％PBS/血

5、必凈預(yù)處理+20％假燙血清刺激組;④10％/20％PBS/血必凈預(yù)處理+20％燙傷血清刺激組，測量血清刺激后30、60、120、180、240min TER指標(biāo)變化，評價(jià)血必凈對RPMEC單層通透性的影響。
　　2.血必凈減輕燒傷后血管內(nèi)皮屏障損傷的機(jī)制
　　50％TBSAⅢ度燙傷大鼠分組處理同前，分別于燙傷后2h、6h，Western blot檢測缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)、肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)水平變化，E

6、LISA法分析VEGF、TNF-α、IL-6及基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）水平變化。
　　RPMEC隨機(jī)分為4組:①PBS預(yù)處理+假燙血清刺激組;②血必凈預(yù)處理+假燙血清刺激組;③PBS預(yù)處理+燙傷血清刺激組;④血必凈預(yù)處理+燙傷血清刺激組，測量血清刺激后4h后各組VEGF、TNF-α、IL-6水平變化。
　　結(jié)果：
　　1.血必凈對燒傷后血管內(nèi)皮屏障的保護(hù)作用
　　與假燙組相比，燙傷后2h，燙傷大鼠肺組織含

7、水率、EB含量、病理損傷評分即開始升高，燙傷后6h上升趨勢更為明顯(P＜0.05);血必凈干預(yù)組上述指標(biāo)優(yōu)于生理鹽水對照組(P＜0.05)。此外，燙傷后2h大鼠肺組織VE-cadherin、ZO-1蛋白表達(dá)水平降低，分別為假燙組的0.75倍、0.55倍;傷后6h下降更為明顯，分別為假燙組的0.39、0.36倍;傷后2h燙傷大鼠肺組織Syndecan-1表達(dá)水平降低，血必凈干預(yù)組上述指標(biāo)優(yōu)于生理鹽水對照組(P＜0.05)。血必凈干預(yù)組大鼠

8、平均生存時(shí)間明顯長于生理鹽水對照組（582.1±21.2 VS345.8±25.4 min, P＜0.01）。
　　與假燙血清刺激相比，燙傷血清刺激后RPMEC跨膜電阻(TER)持續(xù)下降，通透性持續(xù)升高;高濃度燙傷血清(20％)刺激后內(nèi)皮細(xì)胞TER下降更為明顯(P＜0.05)。血必凈高劑量干預(yù)組（20％體積分?jǐn)?shù)）TER高于PBS對照組(P＜0.05);血必凈低劑量組與對照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　2.血必凈減輕燒傷后血管內(nèi)

9、皮屏障損傷的機(jī)制
　　燙傷后2h，燙傷大鼠HIF-1α、MLCK水平即開始升高，分別為假燙組的3.0倍、2.1倍;傷后6h升高更為明顯，分別為假燙組的3.6倍、2.8倍;同時(shí)間點(diǎn)血必凈干預(yù)組HIF-1α、MLCK水平低于生理鹽水對照組(P＜0.05)。此外，燙傷大鼠VEGF、TNF-α、IL-6、MMP-9水平均高于假燙組(P＜0.01)，同時(shí)間點(diǎn)血必凈干預(yù)組上述指標(biāo)低于生理鹽水對照組(P＜0.01)。
　　燙傷血清組RPM

10、EC炎癥因子VEGF、TNF-α、IL-6水平明顯高于假燙血清組(P＜0.01)，血必凈預(yù)處理組VEGF、TNF-α、IL-6水平低于PBS對照組(P＜0.01)。
　　結(jié)論：
　　嚴(yán)重?zé)齻蟪霈F(xiàn)明顯的血管內(nèi)皮屏障損傷，表現(xiàn)為血管內(nèi)皮表面糖萼損傷、內(nèi)皮細(xì)胞間連接破壞、血管通透性增高，進(jìn)而導(dǎo)致組織水腫、器官功能障礙的發(fā)生。燒傷后缺氧與炎癥反應(yīng)通過激活HIF-1α及其下游因子MLCK、VEGF，以及炎癥因子TNF-α、MMP-9