IGFBP-1在肝癌組織中的表達(dá)、功能和作用機(jī)制研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(HCC)已成為癌癥相關(guān)死亡的第二大原因,在全世界范圍內(nèi)其發(fā)病率繼續(xù)上升。在全球范圍內(nèi)，每年大約有750000例肝癌新增病例報(bào)告。以人群為基礎(chǔ)的研究顯示，肝癌發(fā)病率與其病死率大致相同，這表明大多數(shù)肝癌患者死于這種疾病。盡管對(duì)高危病人的監(jiān)測(cè)手段及早期肝癌患者的外科手術(shù)治療和化療方法得到顯著提高，但肝癌患者的總體預(yù)后結(jié)果仍舊不樂觀。因此，需要找到更有效的治療策略和進(jìn)一步研究這一致命疾病的具體機(jī)制十分重要。
　　胰島素樣生長(zhǎng)因子

2、結(jié)合蛋白（IGFBPs）是一種可溶性蛋白質(zhì)，通過與胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）高度結(jié)合從而影響IGF的生物活性，胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1（IGFBP-1）便是IGFBPs家族中的一個(gè)重要成員。IGFBP-1以及IGFBP-3、4和6通常影響IGF與其受體(IGF-R)結(jié)合，導(dǎo)致IGF-IGF-R信號(hào)通路發(fā)生變化，對(duì)下游包括癌細(xì)胞在內(nèi)的靶細(xì)胞產(chǎn)生影響；而IGFBP-2、5可以通過提高IGF配體的生物利用度發(fā)揮生物學(xué)功能。IGFBP-1主要

3、由肝臟合成并分泌到血清中，腎臟、卵巢顆粒細(xì)胞、孕婦子宮蛻膜基質(zhì)細(xì)胞也可以合成IGFBP-1。血清中IGFBP-1以依賴IGF的形式調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、新陳代謝。另外，IGFBP-1可以以不依賴IGF的形式通過與細(xì)胞表面蛋白分子相互作用對(duì)各種細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡發(fā)揮作用。因此，可以想象IGFBP-1的生物學(xué)功能比我們之前認(rèn)為的更復(fù)雜。
　　目的：
　　進(jìn)一步研究Notch信號(hào)調(diào)控肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制；明確IGFBP-1在肝癌

4、患者組織中的表達(dá)，及其與肝癌患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系；在體外，探討IGFBP-1對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡、侵襲的影響及其可能機(jī)制，為以后臨床治療肝癌提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、DAPT阻斷Notch信號(hào)后，細(xì)胞因子芯片技術(shù)檢測(cè)相關(guān)分子的改變。
　　2、RT-PCR、ELISA驗(yàn)證細(xì)胞因子芯片的準(zhǔn)確性。
　　3、采用免疫組化方法在肝癌組織和與之對(duì)應(yīng)的癌旁組織中檢測(cè)IGFBP-1的表達(dá)，探討IGFBP-1的表達(dá)水平

5、與肝癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　4、在MHCC97H、HePG2細(xì)胞系中，外源性添加IGFBP-1重組蛋白，分別利用流式細(xì)胞儀、Transwell小室等試驗(yàn)方法觀察其對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡、侵襲的影響。
　　5、利用western-blot、ELISA檢測(cè)與侵襲能力相關(guān)蛋白ERK、MMP-9、MMP-2表達(dá)量，探討其可能分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　1、IGFBP-1在肝癌組織中低表達(dá)，癌旁組織中高表達(dá)，差異顯著

6、。IGFBP-1的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤大小、單發(fā)多發(fā)、AFP、乙肝病毒感染等無關(guān)；與病理分期、TNM、脈管侵犯及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。單因素、多因素分析顯示，低表達(dá)的IGFBP-1可以作為肝癌患者差預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因子。
　　2、在四種細(xì)胞系中檢測(cè)IGFBP-1的表達(dá)，結(jié)果顯示IGFBP-1在正常肝細(xì)胞中表達(dá)最高，肝癌細(xì)胞系中隨著侵襲能力的增加其表達(dá)降低，提示IGFBP-1參與了肝癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程。
　　3、采用細(xì)胞流式的

7、方法檢測(cè)不同劑量的IGFBP-1對(duì)肝癌細(xì)胞的凋亡的影響，結(jié)果表明IGFBP-1對(duì)凋亡無影響。
　　4、Transwel實(shí)驗(yàn)顯示發(fā)現(xiàn)隨著IGFBP-1的劑量增加，肝癌細(xì)胞的侵襲能力逐漸減弱，提示IGFBP-1抑制肝癌細(xì)胞的侵襲。
　　5、通過ELISA、Western-blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IGFBP-1可以下調(diào)ERK1/2、MMP-2、MMP-9的蛋白表達(dá)水平及其活性。
　　結(jié)論：
　　1、IGFBP-1在肝癌組織中低