IGFBP-1在肝癌組織中的表達、功能和作用機制研究.pdf

1、肝細胞癌(HCC)已成為癌癥相關死亡的第二大原因,在全世界范圍內其發(fā)病率繼續(xù)上升。在全球范圍內，每年大約有750000例肝癌新增病例報告。以人群為基礎的研究顯示，肝癌發(fā)病率與其病死率大致相同，這表明大多數肝癌患者死于這種疾病。盡管對高危病人的監(jiān)測手段及早期肝癌患者的外科手術治療和化療方法得到顯著提高，但肝癌患者的總體預后結果仍舊不樂觀。因此，需要找到更有效的治療策略和進一步研究這一致命疾病的具體機制十分重要。
　　胰島素樣生長因子

2、結合蛋白（IGFBPs）是一種可溶性蛋白質，通過與胰島素樣生長因子（IGF）高度結合從而影響IGF的生物活性，胰島素樣生長因子結合蛋白1（IGFBP-1）便是IGFBPs家族中的一個重要成員。IGFBP-1以及IGFBP-3、4和6通常影響IGF與其受體(IGF-R)結合，導致IGF-IGF-R信號通路發(fā)生變化，對下游包括癌細胞在內的靶細胞產生影響；而IGFBP-2、5可以通過提高IGF配體的生物利用度發(fā)揮生物學功能。IGFBP-1主要

3、由肝臟合成并分泌到血清中，腎臟、卵巢顆粒細胞、孕婦子宮蛻膜基質細胞也可以合成IGFBP-1。血清中IGFBP-1以依賴IGF的形式調控細胞的生長、分化、新陳代謝。另外，IGFBP-1可以以不依賴IGF的形式通過與細胞表面蛋白分子相互作用對各種細胞的增殖、遷移、凋亡發(fā)揮作用。因此，可以想象IGFBP-1的生物學功能比我們之前認為的更復雜。
　　目的：
　　進一步研究Notch信號調控肝癌侵襲轉移的機制；明確IGFBP-1在肝癌

4、患者組織中的表達，及其與肝癌患者臨床病理特征和預后的關系；在體外，探討IGFBP-1對肝癌細胞凋亡、侵襲的影響及其可能機制，為以后臨床治療肝癌提供理論基礎。
　　方法：
　　1、DAPT阻斷Notch信號后，細胞因子芯片技術檢測相關分子的改變。
　　2、RT-PCR、ELISA驗證細胞因子芯片的準確性。
　　3、采用免疫組化方法在肝癌組織和與之對應的癌旁組織中檢測IGFBP-1的表達，探討IGFBP-1的表達水平

5、與肝癌患者臨床病理特征及預后的關系。
　　4、在MHCC97H、HePG2細胞系中，外源性添加IGFBP-1重組蛋白，分別利用流式細胞儀、Transwell小室等試驗方法觀察其對肝癌細胞凋亡、侵襲的影響。
　　5、利用western-blot、ELISA檢測與侵襲能力相關蛋白ERK、MMP-9、MMP-2表達量，探討其可能分子機制。
　　結果：
　　1、IGFBP-1在肝癌組織中低表達，癌旁組織中高表達，差異顯著

6、。IGFBP-1的表達與患者的年齡、性別、腫瘤大小、單發(fā)多發(fā)、AFP、乙肝病毒感染等無關；與病理分期、TNM、脈管侵犯及遠處轉移相關。單因素、多因素分析顯示，低表達的IGFBP-1可以作為肝癌患者差預后的一個獨立危險因子。
　　2、在四種細胞系中檢測IGFBP-1的表達，結果顯示IGFBP-1在正常肝細胞中表達最高，肝癌細胞系中隨著侵襲能力的增加其表達降低，提示IGFBP-1參與了肝癌的侵襲轉移過程。
　　3、采用細胞流式的

7、方法檢測不同劑量的IGFBP-1對肝癌細胞的凋亡的影響，結果表明IGFBP-1對凋亡無影響。
　　4、Transwel實驗顯示發(fā)現隨著IGFBP-1的劑量增加，肝癌細胞的侵襲能力逐漸減弱，提示IGFBP-1抑制肝癌細胞的侵襲。
　　5、通過ELISA、Western-blot實驗發(fā)現IGFBP-1可以下調ERK1/2、MMP-2、MMP-9的蛋白表達水平及其活性。
　　結論：
　　1、IGFBP-1在肝癌組織中低