直流電場對雞胚尿囊膜載羥基磷灰石模型血管化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景：
　　實(shí)驗(yàn)一：利用第8天至第12天雞胚尿囊膜（Chicken embryo allantoic membrane，CAM）血管的快速生長期，可研究羥基磷灰石（Hydroxyapatite，HA）對CAM血管生長的影響情況。
　　實(shí)驗(yàn)二：將外源性直流電場(Direct Current Electric Field，DCEF)加入雞胚尿囊膜載羥基磷灰石模型后，觀察CAM血管化變化，可觀察DCEF對區(qū)域血管生長的影響。

2、>　　目的：
　　實(shí)驗(yàn)一： HA加載于雞胚CAM模型，建立研究血管化的模型。
　　實(shí)驗(yàn)二：于建立好的雞胚尿囊膜載羥基磷灰石模型上，加載穩(wěn)恒DCEF，觀察其對CAM血管化的影響，探討穩(wěn)恒DCEF在促進(jìn)組織工程骨的快速預(yù)血管化及成骨方面可能具有的重大作用。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一：將12枚羅曼品系雞蛋于相同適宜條件下孵化至第8天，開窗后隨機(jī)分為2組，實(shí)驗(yàn)組植入羥基磷灰石材料，建立雞胚尿囊膜載羥基磷灰石模型；對照組放入

3、濾紙材料，密封后移入恒溫恒濕箱內(nèi)繼續(xù)孵化。待孵化至第12天后，通過CSW-X視頻顯微鏡采集圖像，Image J收集CAM血管長度及單位面積血管長度數(shù)據(jù)資料，以及切片觀察羥基磷灰石及濾紙材料上的血管新生狀況。
　　實(shí)驗(yàn)二：將12枚孵化至第8天的羅曼品系雞蛋開窗后，植入羥基磷灰石材料，建立雞胚尿囊膜載羥基磷灰石模型后，于羥基磷灰石表面滴加融化瓊脂覆蓋，隨機(jī)均分為2組；密封后移入恒溫恒濕箱內(nèi)，使用銀針插入瓊脂內(nèi)導(dǎo)電，實(shí)驗(yàn)組加載-1.5v

4、外源性穩(wěn)恒DCEF后繼續(xù)孵化，對照組不加載DCEF繼續(xù)孵化。待加電24、48小時(shí)后，通過CSW-X視頻顯微鏡采集圖像，Image J和AngioTool軟件收集血管長度及血管生長方向數(shù)據(jù)資料，以及切片觀察羥基磷灰石材料內(nèi)血管新生狀況。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一：①待孵化至12天后，實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本平均CAM血管新生成長度為24.031±2.735mm，平均單位面積血管新生成長度為0.242±0.046mm/mm2；對照組標(biāo)本平均CA

5、M血管新生成長度為23.561±1.661mm，平均單位面積血管新生成長度為0.212±0.052mm/mm2，組間血管新生成長度及平均CAM血管新生成長度比較差異無顯著性意義（P>0.05）；②實(shí)驗(yàn)組羥基磷灰石材料切片標(biāo)本有明顯類血管組織生成。
　　實(shí)驗(yàn)二：①加電孵化24小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本平均CAM血管生成長度為11.93±0.89mm，對照組標(biāo)本平均CAM血管生成長度為8.69±0.71mm。待孵化48小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本平均C

6、AM血管生成長度為12.66±0.65mm，對照組標(biāo)本平均CAM血管生成長度為9.65±0.57mm，差值有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；②加電孵化48小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組平均血管角度87.16°±54.76°變?yōu)?3.36°±21.63°，血管向心性生長趨勢明顯。對照組平均血管角度81.07°±47.23°變?yōu)?3.17°±51.64°，血管生成方向無明顯改變。③加電孵化48小時(shí)后，實(shí)驗(yàn)組血管生成速率為0.101mm/h，對照組血管生成速率為