霍山石斛多糖消化穩(wěn)定性研究.pdf

1、本文以霍山石斛多糖(DHP-2A)為研究材料，采用柱前熒光衍生-高效液相色譜法研究熒光標記的霍山石斛多糖（DHP-2A-tyr-FITC）在體內(nèi)胃腸道中分子量的變化行為，然后通過體外模擬胃腸道消化實驗對體內(nèi)實驗進行驗證，探索霍山石斛多糖在胃腸道中降解機制，最后對胃腸道中穩(wěn)定存在的霍山石斛多糖片段進行體外制備。取得的研究結(jié)果如下:
　　(1)制備了熒光標記的霍山石斛多糖（DHP-2A-tyr-FITC）。本文采用間接法對霍山石斛多糖

2、(DHP-2A)進行熒光標記，首先利用霍山石斛多糖(DHP-2A)的還原性末端醛基在氰基硼氫化鈉的催化下與酪胺反應(yīng)生成霍山石斛多糖-酪胺復(fù)合物(DHP-2A-tyr)，然后DHP-2A-tyr的仲氨基在弱堿條件下與異硫氰酸熒光素(FITC)的氰基發(fā)生親核反應(yīng)，生成霍山石斛多糖-酪胺-異硫氰酸復(fù)合物（DHP-2A-tyr-FITC），進而達到對霍山石斛多糖的標記。該熒光標記法是在多糖的末端進行選擇性標記，不會破壞多糖的內(nèi)部結(jié)構(gòu)及影響多糖的

3、生物學(xué)特征。
　　(2)分析了霍山石斛多糖（DHP-2A）在消化道中的變化行為?；诙嗵菬晒鈽擞浖夹g(shù)，采用熒光檢測器和高效液相色譜儀追蹤霍山石斛多糖(DHP-2A)口服0～24 h內(nèi)在小鼠的胃、小腸、大腸、糞便、尿液及血液中的變化狀況。結(jié)果顯示:在小鼠的胃和小腸中除了檢測到霍山石斛多糖(DHP-2A)外，還檢測到了一個新的熒光物質(zhì)且該物質(zhì)的洗脫時間滯后于霍山石斛多糖（DHP-2A），而在小鼠的大腸及糞便中只檢測到霍山石斛多糖（DH

4、P-2A），在小鼠的血液中只檢測到新物質(zhì)的熒光信號且該物質(zhì)的洗脫時間與胃和小腸中檢測的新物質(zhì)的洗脫時間相似。以上實驗表明，霍山石斛多糖(DHP-2A)經(jīng)口服作用進入胃腸道后可能發(fā)生了降解作用，生成了一個可以在胃腸道中穩(wěn)定存在的霍山石斛多糖片段。
　　(3)探索了霍山石斛多糖（DHP-2A）在胃腸道中降解的機制。首先追蹤了霍山石斛多糖在體外模擬唾液、胃液及腸液中的變化狀況，結(jié)果顯示，霍山石斛多糖（DHP-2A）在體外胃液中發(fā)生降解生

5、成一個穩(wěn)定存在的片段且其保留時間與體內(nèi)實驗結(jié)果一致，而在體外唾液、腸液中穩(wěn)定，這就說明霍山石斛多糖（DHP-2A）降解的部位是小鼠的胃。然后對胃液中各種鹽及pH等具體分析，可知霍山石斛多糖（DHP-2A）在各種鹽溶液中穩(wěn)定但在酸溶液中不穩(wěn)定，這就說明pH是使霍山石斛多糖（DHP-2A）在消化過程中分子量損失的一個主要原因。最后采用DNS法檢測霍山石斛多糖(DHP-2A)在酸溶液中的還原糖的動態(tài)變化，結(jié)果顯示霍山石斛多糖(DHP-2A)在

6、短時間內(nèi)還原糖顯著增加而隨著水解時間延長到一定時間的還原糖又幾乎保持不變，這就說明糖苷鍵的斷裂是新片段形成的主要原因。綜上可知，霍山石斛多糖（DHP-2A）在體外模擬胃液消化實驗中可以生成與體內(nèi)消化實驗一樣的穩(wěn)定存在的霍山石斛多糖片段，且該片段的是由胃酸引起的糖苷鍵的斷裂形成的。
　　(4)驗證了霍山石斛多糖片段的活性及體內(nèi)穩(wěn)定性。通過對霍山石斛多糖(DHP-2A)及其片段的小腸粘膜免疫活性評價可知，與霍山石斛多糖(DHP-2A)