離心運動對骨骼肌細胞膜骨架蛋白含量影響的研究.pdf

1、1 研究目的 研究肌細胞膜骨架蛋白dystrophin在大強度離心運動及適應性訓練后的含量變化特點，分析肌細胞膜骨架蛋白缺失與延遲性骨骼肌損傷時血清酶升高的關系，及其對肌細胞膜部分功能的影響，探討細胞膜骨架蛋白在骨骼肌纖維中存在的特點和作用。 2 研究方法 以雄性Wistar大鼠為研究對象，進行“一次性大強度離心運動”和“6周適應性離心運動訓練”兩種方式運動。其中一次性離心運動實驗為-16°下坡跑臺跑，

2、定量大負荷間歇性運動，跑速為26.8m/min，運動5min×10組，組間歇1min。適應性離心訓練為6周，每周5天訓練，速度從20.0m/min增加到35.0m/min，每次20min，-5°下坡間歇跑。離心運動后不同時段和適應性訓練后取大鼠后肢腓腸肌外側頭進行分析。 樣本-20℃冷凍切片，15μm厚?！爱惾拘匀玖?腺苷三磷酸酶法”鑒別肌纖維類型；抗C端單克隆抗體，二步免疫組化法和免疫印跡法檢測Dystrophin含量。地高辛

3、標記的寡核苷酸探針原位雜交檢測Dystrophin基因表達。用Scion Image進行組織切片的圖像分析。 酶動力法測試血清CK、LDH含量。黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法分別用于肌肉勻漿SOD和MDA檢測。測定肌細胞膜Na+-K+-ATPase活性。以DPH和N[3P]M為探針，用熒光分光光度計分別測定肌細胞膜脂質流動性和膜蛋白的活動性。 3 研究結果 3.1 I型纖維中的dystrophin含量在離心運動后

4、即刻沒有明顯的變化，在隨后的4小時和24小時，有下降的趨勢，在運動后48小時和72小時則明顯減少（P＜0.05）；Iia型纖維中的Dystrophin含量各個時相均沒有顯著性的變化；Iib型纖維中的dystrophin含量在離心運動后即刻就有明顯的下降（P＜0.05）。但在其后的各時相基本保持穩(wěn)性，不再有明顯的變化。 3.2 離心運動后即刻dystrophin基因表達水平明顯下降(P＜0.05)，為安靜組的28％；并在隨后時相內

5、逐漸升高，在48小時達到最大，為安靜組的172％。 3.3 進行適應性訓練的大鼠肌細胞膜骨架蛋白的dystrophin含量有上升的趨勢。大強度定量負荷后，訓練組肌細胞膜dystrophin含量減少的幅度具有小于對照組的趨勢。 3.4 一次性離心運動后，膜脂質流動性逐漸變低，并在運動后48小時達最低。一次性運動后的膜蛋白活動性，則在運動后逐漸增高，并在12小時達最高，24小時降低后又在48小時再次升高。適應性訓練后的膜脂流

6、動性，在定量負荷后，訓練組明顯低于其對照組。膜蛋白活動性則沒有顯著的組間差異。 3.5未發(fā)現(xiàn)肌細胞膜骨架蛋白含量的變化與自由基代謝指標及血清CK、LDH有明顯的相關關系。細胞膜骨架蛋白dystrophin含量與膜蛋白活動性呈負相關r=-0.722(P<0.05)。 3.6 適應性訓練后的離心運動測試結果中，血清CK、LDH與膜質流動性正相關，其中CK與膜脂質流動性有具顯著意義的正相關，r=0.802；與膜蛋白活動性具有負

7、相關趨勢。同時膜脂質流動性與膜蛋白活動性有負相關的趨勢。在一次性離心運動測試結果中，肌細胞膜上Na+-K+-ATPase活性與脂質流動性正相關r=0.518。 4 結論 4.1 肌細胞膜骨架蛋白dystrophin在離心運動的即時損傷中，以Iib型纖維中的缺失為主，延遲損傷以I型纖維中的缺失為主。 4.2 進行適應性訓練的大鼠肌細胞膜骨架蛋白dystrophin的含量有上升的趨勢。 4.3 膜骨