水產(chǎn)品中副溶血性弧菌生長異質(zhì)性的研究.pdf

1、副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，VP）是水產(chǎn)品中一類對人類具有高致病性的主要食源性桿菌，對VP進行量化風(fēng)險評估（Quantitative Microbial Risk Assessment）可以有效預(yù)防和控制水產(chǎn)品中致病性VP的污染，保證食品安全。而量化微生物風(fēng)險評估需要科學(xué)的構(gòu)建VP的生長模型，充分考慮影響其生長異質(zhì)性的因素,包括溫度、鹽度、來源、介質(zhì)以及其內(nèi)在基因型等。不同菌株在同一實驗環(huán)境下的生長情況

2、展現(xiàn)了多菌株復(fù)合體的生長異質(zhì)性，基于不同影響因素構(gòu)建的多菌株生長宏模型，將為開展鑒定食源性致病菌生長異質(zhì)性風(fēng)險評估提供更準(zhǔn)確的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和生長模型。因此研究VP的生長異質(zhì)性有助于我們探索其菌株特異性的內(nèi)因與外因，從而更為全面的評估VP給食品安全性帶來的風(fēng)險。因此，本文旨在：1）研究溫度及鹽度對50種不同的VP菌株生長異質(zhì)性帶來的影響2）研究不同的來源對VP的生長異質(zhì)性所造成的影響3）進一步研究基因分型對VP生長的內(nèi)在效應(yīng)4）探究不同的培養(yǎng)

3、介質(zhì)對VP生長異質(zhì)性的影響。本課題主要研究內(nèi)容和研究結(jié)果如下：
　　1.基于純培養(yǎng)基中副溶血性弧菌生長異質(zhì)性的研究
　　本研究對不同來源和不同基因型的50種副溶血性弧菌菌株，分別在4個溫度梯度（10℃，20℃，30℃，37℃）和5個鹽度梯度（0.5％，3％，5%，7％，9％）下的生長動力學(xué)特征進行了評估。通過自動比濁系統(tǒng)Bioscreen描繪VP的生長曲線，并利用Modified Gompertz模型計算出其在不同環(huán)境組合的

4、最大比生長速率，進而比較得出溫度及鹽度這兩種重要的環(huán)境因素，其影響程度不盡相同：低溫對于最大生長速率μmax降低的影響要大于高NaCl濃度，因此在鹽性環(huán)境中的腌制食品建議應(yīng)保存在低于10℃以下的溫度環(huán)境中，這樣可以保證副溶血性弧菌菌株全部失活；同時證明了37℃和3%氯化鈉濃度組合是副溶血性弧菌最佳生長條件的結(jié)論。進一步分析最大生長速率μmax的變異系數(shù)發(fā)現(xiàn)，隨著處于活化范圍內(nèi)的溫度及鹽度等生長條件變得越來越惡劣，其菌株的生長異質(zhì)性也會增

5、大。對比不同來源的菌株分類可知，淡水養(yǎng)殖產(chǎn)品中的副溶血性弧菌菌株比海水養(yǎng)殖產(chǎn)品中的菌株的變異情況更明顯。另外，實驗結(jié)果表明，基因異質(zhì)性也會影響副溶血性弧菌菌株的生長異質(zhì)性，tlh+/tdh+/trh–的基因型生長異質(zhì)性的變化程度最大，因此在臨床副溶血性弧菌菌株的食品安全控制中，建議應(yīng)更多地注意與高致病性和高生長異質(zhì)性相關(guān)的tlh+/tdh+/trh–的基因型。總之，本研究旨在預(yù)防微生物學(xué)及微生物風(fēng)險評估中加入菌株生長異質(zhì)性的影響因素，有

6、利于促進學(xué)科的完善，提高評估的精確性；同時本實驗的研究發(fā)現(xiàn)為自然條件下副溶血性弧菌的辨別及預(yù)防提供了科學(xué)的指導(dǎo)意見，對于實驗條件下菌株的選育具有十分重要的參考意義。
　　2.基于三文魚中副溶血性弧菌生長異質(zhì)性的研究
　　本實驗采集3株分別來自于淡水、海水和臨床的副溶血性弧菌菌株，在無菌三文魚樣本中進行培養(yǎng)并貯藏于6個不同溫度（4，7，10，15，25，30℃）下，采用Modified Gompetz生長模型及Modified

7、 Baranyi失活模型進行擬合得到生長動力學(xué)參數(shù)，對其進行生長異質(zhì)性的分析。結(jié)果表明溫度對VP的生長動力學(xué)行為產(chǎn)生十分顯著的影響，溫度越低其最大生長速率越低；來源同樣影響副溶血性弧菌的生長變異性，淡水菌株的生長異質(zhì)性比海水菌株及病人菌株的生長異質(zhì)性要大；但溫度對VP生長的影響比來源大；在失活狀態(tài)下三株菌的生長動力學(xué)行為差異性極顯著，同樣說明環(huán)境越惡劣，其生長變異性越大。本研究著重強調(diào)了三文魚中失活狀態(tài)下的VP菌株也需要進行風(fēng)險評估的量

8、化，在實際生產(chǎn)過程中有助于更好的預(yù)防致病性VP菌株對食品安全構(gòu)成的威脅，保證食品的食用安全。3.副溶血性弧菌在兩種不同介質(zhì)中（蝦及三文魚）生長異質(zhì)性的比較分析
　　本研究第一部分實驗利用VP菌株ATCC33847(tlh+/tdh+/trh–)在六個溫度梯度下(4℃、7℃、10℃、15℃、25℃、30℃)分別在蝦和三文魚兩種介質(zhì)中進行培養(yǎng),利用Modified Gompertz模型及Modified Baranyi模型分別進行生長

9、曲線擬合來計算最大生長速率及致死速率，探究VP在蝦和三文魚兩種培養(yǎng)介質(zhì)下的生長異質(zhì)性。結(jié)果表明介質(zhì)對VP生長異質(zhì)性的影響十分顯著；環(huán)境越惡劣，在不同培養(yǎng)介質(zhì)中VP的生長差異性也越大；另外在失活狀態(tài)下的致死速率比較揭示了溫度降低的影響對三文魚中培養(yǎng)的副溶血性弧菌的影響比在蝦中的弱。利用Belehradek方程作為VP生長的二級模型得到該株菌在蝦中及三文魚中最大比生長速率及延滯時間的系數(shù)，表明在生長狀態(tài)下，在蝦中培養(yǎng)的菌株比在三文魚中生長的