重組細粒棘球蚴親肌肉抗原抗小鼠感染細粒棘球蚴免疫保護性及其機制的研究

1、（（（寧夏醫(yī)科大碩士學(xué)位論文中文摘要重組細粒棘球蚴親肌肉抗原抗小鼠感染細粒棘球蚴的免疫保護性及其機制研究摘要目的:對構(gòu)建的純化重組親肌肉抗原（rEg.myophilin）進行免疫保護和免疫機制的研究，為包蟲病分子疫苗的研制提供新的候選分子。方法：(1)疫苗制備：重組Eg.myophlilinpET28a工程菌株的大量表達、純化及疫苗制備。（2）動物分組方案：選取111只小鼠隨即分為A、B對照組和實驗組C組，分別對其進行皮下PBS、PBS

2、佐劑和PBS加佐劑加候選疫苗的注射，之后分別用同樣的試劑對其對應(yīng)組進行兩次加強免疫；最后用1500只細粒棘球蚴的原頭蚴腹腔攻擊感染。（3）免疫保護力計算：（免疫保護力計算公式：減囊率=1實驗組平均包囊數(shù)對照組平均包囊數(shù)100%）。4）對小鼠進行免疫保護機制的研究，①體液免疫抗體指標的測定：從領(lǐng)取小鼠開始按不同的時間點，分別分批次對小鼠采血，進行血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE水平的測定；②細胞免疫檢測：從領(lǐng)

3、取小鼠即開始按不同的時間點，分別分批次對小鼠取脾臟，并脾細胞刺激培養(yǎng)，監(jiān)測其細胞因子IFNγ、IL4和IL10的水平。結(jié)果：(1)rEg。myophilin能誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生86.11%以上的免疫保護力。2）采集血清進行ELISA血清抗體IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgE以及細胞因子IFNγ、IL4和IL10的檢測，結(jié)果表明：抗體IgG、IgG1、IgG2a以及IgE，和細胞因子IFNγ、IL4分別在免疫之后出現(xiàn)了增

4、高，對照組IL10在攻擊感染后出現(xiàn)了明顯的增高，而在實驗組則沒有相應(yīng)的增高。結(jié)論：(1)rEg.myophilin為極具應(yīng)用潛質(zhì)的疫苗候選分子。2）對rEg.myophilin產(chǎn)生的免疫保護性可能機制：①抗體介導(dǎo)的體液免疫，IgG及其亞類IgG1和IgE介導(dǎo)的體液免疫，在抗細粒棘球蚴感染過程中發(fā)揮重要作用；②細胞免疫中，細胞因子水平變化顯示Th1類免疫應(yīng)答在試驗組免疫保護中占優(yōu)勢作用，有利于機體抵御細粒棘球蚴的感染；③該疫苗候選分子的注

5、入使得免疫抑制機制得到了有效地阻遏，有利于機體的抗寄生蟲。④體液免疫和細胞免疫相輔相成，相互促進，表現(xiàn)在：IL4在IgE亞型類別轉(zhuǎn)換中起到了II寧夏醫(yī)科大碩士學(xué)位論文英文摘要Studiesofimmunoptectionitsmechanismofrecombinantmyophilin（rEg.myophilin）againstEchinococcusGranulosusinmiceAbstractObject:Toidentifyv

6、accinecidateacterofrecombinantmyophilinagainsthydatidosis，throughdetectingtheimmunoprotectionitsmechanism.Methods:(1)WeexpressedpurifytheproteinfromrecombinantengineeringbacteriarEg.myophlilinpET28athenidentifieditsimmun

7、oacter.(2)WepreparatedthevaccinebyemulsifyingrEg.myophilinwithcompleteimcompleteFreundsadjuvantfimmunizationbooster.(3)ThreegroupsoffemalemicewereusedgroupedthemasABCwhichwereimmunizedsubcutaneouslywithphosphatebuffereds

8、aline(PBS)Freund’scompleteadjuvant(FCA)inPBSrEg.myophilinwithFCArespectively.Twoweeksafteradditionaltwoboostersmicewerechallengedwith1500Egprotoscoleces(PSCs)intraperitoneally.(4)immunoprotectionwascomputedbyfmula:reduct

9、ionincystload=1(averageofcystsintestgroupaverageofcystsincontrolgroup)100%.Serumspleenswerecollectedatdifferenttimepointbysacrificing5miceineachgroup.Antibodiesinserumcytokinesinsupernatantoflymphocytesculturesweremeasur

10、ed.Result:miceimmunizedwithrEg.myophilinproducedeffectiveimmunityprotection(reductionsincystloadare89.86%86.11%comparedwithgroupAB).ComparedtocontrolgroupsmiceimmunizedwithrEg.myophilinshowedthatspecificIgGIgG1IgG2aIgEac

11、companiedbyIFNγIL4significantlyincreasedafteronemetimesofimmunizationbutneitherIgG2bnIgG3increased.NeverthelessIL10significantlyincreasedinthecontrolgroupscomparedwithrEg.myophilingroupinwhichitappearedadeclinetrend.Conc

12、lusion：rEg.myophilinwasidentifiedasavaccinecidatefitseffectiveprotection(reductionincystload86.11%)rEg.myophilinshowedaeffectivelyprotectiveimmunitywhichmayattributeto:(1)IgGsIgEmediatedhumalimmuneresponse(2)cellmediated