白藜蘆醇抗胃癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文白藜蘆醇抗胃癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：周海波申請學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：內(nèi)科消化指導(dǎo)教師：朱菊人20030421山東大學(xué)博士學(xué)位論文白藜蘆醇抗胃癌的實(shí)驗(yàn)研究博士研究生周海波導(dǎo)師朱菊人摘要目的胃癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率目前居我國惡性腫瘤的首位，手術(shù)切除是治療胃癌的首選方法，但由于臨床缺乏特異性癥狀和體征，早期診斷率較低，手術(shù)對進(jìn)展期胃癌的治療效果并不理想，根治手術(shù)后有50％患者5年內(nèi)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)和／或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，

2、常見的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移部位是切除部位、肝臟和腹膜表面。因此，除手術(shù)和放療外，化療仍是胃癌治療的主要手段。白藜蘆醇是普遍存在于葡萄屬植物中的一種物質(zhì)。對白藜蘆醇藥理作用的認(rèn)識(shí)源自“frenchparadox”現(xiàn)象，其重要原因在于法國人飲用紅葡萄酒，而紅葡萄酒含有多酚類化合物，具有抗脂質(zhì)過氧化作用，脂質(zhì)過氧化在動(dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的發(fā)生中起著非常重要的作用，白藜蘆醇即是這些多酚類化合物之一。近年來發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇還具有抗癌作用，從而開辟了白藜蘆醇

3、生物活性研究的新領(lǐng)域。本研究取人胃癌組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，采用~釘汀比色法測定白藜蘆醇對胃癌原代細(xì)胞的生長抑制率；探討白藜蘆醇在體外誘導(dǎo)人胃癌原代細(xì)胞發(fā)生凋亡的可能性，揭示該凋亡發(fā)生與bcl一2和bax之間的關(guān)系：利用人胃癌原代細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，進(jìn)一步評價(jià)白藜蘆醇在體內(nèi)誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡的有效性及其作用機(jī)制，同時(shí)為其臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和方法學(xué)依據(jù)。方法在嚴(yán)格無菌條件下，取手術(shù)切除的新鮮胃癌組織標(biāo)本，制各單細(xì)胞懸液，以臺(tái)盼藍(lán)染色法計(jì)數(shù)活細(xì)胞

4、，調(diào)整單細(xì)胞懸液至活細(xì)胞濃度為5105／ml。培養(yǎng)后人工純化為胃癌細(xì)胞。采用MTT比色法測定白藜蘆酵、絲裂霉素和紫杉醇對胃癌原代細(xì)胞的生長抑制率；細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化采用透射電鏡觀察；TUNEL染色法測定胃癌原代細(xì)胞凋亡率；通過免疫組織化學(xué)法和RT—PCR檢測凋亡相關(guān)基因bcl一2和bax的表達(dá)。Balb／C裸鼠5只，無菌條件下，裸鼠右后背側(cè)部或右頸部皮下接種原代細(xì)胞懸液，接種后，裸鼠在無菌、恒溫和恒濕條件下飼養(yǎng)，每日觀察確定腫瘤出現(xiàn)時(shí)