江南大學(xué)1990-2009年生物化學(xué)歷年真題部分問(wèn)答題答案

1、江南大學(xué)19902009年生物化學(xué)歷年真題部分問(wèn)答題答案第1頁(yè)共17頁(yè)1、五只試劑瓶中分別裝的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液，試用最簡(jiǎn)便的化學(xué)方、五只試劑瓶中分別裝的是核糖、葡萄糖、果糖、蔗糖和淀粉溶液，試用最簡(jiǎn)便的化學(xué)方法鑒別。法鑒別。答：答：依次使用下列化學(xué)試劑進(jìn)行鑒定2、某一已純化的蛋白無(wú)、某一已純化的蛋白無(wú)SDS的凝膠電泳圖如下所示，兩種情況下的電極槽緩沖液都為的凝膠電泳圖如下所示，兩種情況下的電極槽緩沖液都為8.2從下面

2、兩副圖給出的信息，有關(guān)純化蛋白的結(jié)構(gòu)你能得出什么結(jié)論？該蛋白的從下面兩副圖給出的信息，有關(guān)純化蛋白的結(jié)構(gòu)你能得出什么結(jié)論？該蛋白的PI是大于還是大于還是小于是小于8.2？答：答：非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)時(shí)主要是根據(jù)各組分的pI的差別。圖（a）的結(jié)果只呈現(xiàn)單一的帶，根據(jù)題中給出的條件，表明該蛋白質(zhì)是純凈的。由于SDS是一種帶負(fù)電荷的陰離子去垢劑，并且具有長(zhǎng)長(zhǎng)的疏水性碳?xì)滏?。它的這種性質(zhì)不僅使寡聚蛋白質(zhì)的亞基拆離，而且還能拆開(kāi)肽鏈

3、的折疊結(jié)構(gòu)，并且沿伸展的肽鏈吸附在上面。這樣，吸附在肽鏈上的帶負(fù)電荷的SDS分子使肽鏈帶凈負(fù)電荷，并且吸附的SDS量與肽鏈的大小成正比。結(jié)果是，不同大小的肽鏈將含有相同或幾乎相同的qr值。由于聚丙烯酰胺凝膠基質(zhì)具有篩分效應(yīng)，所以，分子較小的肽鏈將比較大的、但具有相同的qr值的肽鏈遷移得更快。若蛋白質(zhì)是由單一肽鏈或共價(jià)交聯(lián)的幾條肽鏈構(gòu)成（在不含β巰基乙醇的情況下），那么在用SDS處理后進(jìn)行SDSPAGE，其結(jié)果仍是單一的一條帶。若蛋白質(zhì)是

4、由幾條肽鏈非共價(jià)結(jié)合在一起，在用SDS處理后進(jìn)行SDSPAGE，則可能出現(xiàn)兩種情況：一種仍是一條帶，但其位置發(fā)生了變化（遷移得更快），表明此蛋白質(zhì)是由幾條相同的肽鏈構(gòu)成，另一種可能出現(xiàn)幾條帶，則可以認(rèn)為該蛋白質(zhì)是由大小不同的幾條肽鏈構(gòu)成。圖（b）的結(jié)果表明該蛋白質(zhì)是由兩種大小不同的肽鏈借非共健結(jié)合在一起的寡聚體蛋白質(zhì)。從圖（b）的電泳結(jié)果我們可以斷定該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)低于8.2。3、含有以下四種蛋白質(zhì)混合物：、含有以下四種蛋白質(zhì)混合物：A

5、，分子量，分子量12000，pI=10；B，分子量，分子量62000，pI=3；C，分子量，分子量28000，pI=7；D，分子量，分子量9000，pI=5。若不考慮其他因素，當(dāng)它們（。若不考慮其他因素，當(dāng)它們（1）流過(guò)）流過(guò)DEAE纖維素陰離子交換柱時(shí)，用線性鹽洗脫時(shí)。纖維素陰離子交換柱時(shí)，用線性鹽洗脫時(shí)。（2）流經(jīng)）流經(jīng)SephadexG75凝膠過(guò)濾柱凝膠過(guò)濾柱時(shí)，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如何？陰離子交換柱起始時(shí)，這些蛋白質(zhì)的洗脫順序如

6、何？陰離子交換柱起始pH可選擇什么范圍?？蛇x擇什么范圍。江南大學(xué)19902009年生物化學(xué)歷年真題部分問(wèn)答題答案第3頁(yè)共17頁(yè)為變性蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)變性的實(shí)質(zhì)是蛋白質(zhì)分子中的次級(jí)鍵破壞，引起天然構(gòu)像解體，變性不涉及共價(jià)鍵的斷裂。蛋白質(zhì)變性后許多性質(zhì)發(fā)生了改變：（1）生物活性喪失：蛋白質(zhì)的生物活性是指蛋白質(zhì)具有的酶、激素、毒素、抗原與抗體等活性，以及其他特殊性質(zhì)如血紅蛋白的載氧能力等，這是蛋白質(zhì)變性的主要特征。（2）一些側(cè)鏈基團(tuán)暴露：蛋白質(zhì)

7、變性時(shí)、原來(lái)在分子內(nèi)部保藏而不易與化學(xué)試劑起反應(yīng)的側(cè)鏈基團(tuán)，由于結(jié)構(gòu)的伸展松散而暴露出來(lái)。（3）一些物理化學(xué)性質(zhì)改變：蛋白質(zhì)變性后，疏水基外露，溶解度降低，易形成沉淀析出；分子形狀也發(fā)生改變，球狀蛋白分子伸展，不對(duì)稱性加大，表現(xiàn)為粘度增加，旋光性、紫外吸收光譜等改變、擴(kuò)散系數(shù)降低。（4）生物化學(xué)性質(zhì)的改變：蛋白質(zhì)變性后，分子結(jié)構(gòu)伸展松散，易被蛋白水解酶分解。9、描述蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)及高級(jí)結(jié)構(gòu)，并說(shuō)明一級(jí)結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系。、描述蛋白質(zhì)

8、的一級(jí)結(jié)構(gòu)及高級(jí)結(jié)構(gòu)，并說(shuō)明一級(jí)結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系。答：答：蛋白質(zhì)是生物大分子，具有明顯的結(jié)構(gòu)層次性，由低層到高層可分為一級(jí)結(jié)構(gòu)、二級(jí)結(jié)構(gòu)、三級(jí)結(jié)構(gòu)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)：是指肽鏈的氨基酸組成及其排列順序，包括二硫鍵的位置。氨基酸序列決定蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)：是指蛋白質(zhì)多肽鏈主鏈的空間走向（折疊和盤繞方式），是有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象。天然蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要有四種基本類型：α螺旋，β折疊和β轉(zhuǎn)角和無(wú)規(guī)卷曲。復(fù)雜的蛋白質(zhì)分子結(jié)

9、構(gòu)，就由這些比較簡(jiǎn)單的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元進(jìn)一步組合而成。蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)：多肽鏈在二級(jí)結(jié)構(gòu)、超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上進(jìn)一步盤繞、折疊形成的緊密地借各種次級(jí)鍵維持的球狀分子構(gòu)象。由兩條或兩條以上肽鏈通過(guò)非共價(jià)鍵構(gòu)成的蛋白質(zhì)稱為寡聚蛋白質(zhì)。其中每一條多肽鏈稱為亞基，每個(gè)亞基都有自己的一、二、三級(jí)結(jié)構(gòu)。亞基單獨(dú)存在時(shí)無(wú)生物活性，只有相互聚合成特定構(gòu)象時(shí)才具有完整的生物活性。蛋白質(zhì)四級(jí)結(jié)構(gòu)：具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈通過(guò)次級(jí)鍵彼此締合形成的聚集體。每個(gè)具有

10、三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽稱為亞基。四級(jí)結(jié)構(gòu)就是各個(gè)亞基在寡聚蛋白的天然構(gòu)象中空間上的排列方式。一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)的共價(jià)鍵的全部情況，一級(jí)結(jié)構(gòu)包含著決定高級(jí)結(jié)構(gòu)的因素，蛋白質(zhì)的種類和生物活性都與肽鏈的氨基酸種類和排列順序有關(guān)，蛋白質(zhì)分子肽鏈的排列順序包含了自動(dòng)形成復(fù)雜的三維結(jié)構(gòu)（即正確的空間構(gòu)象）所需要的全部信息，所以一級(jí)結(jié)構(gòu)決定其高級(jí)結(jié)構(gòu)，蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)決定于蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)。10、請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一種測(cè)定蔗糖酶、請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一種測(cè)定蔗糖酶Km及Vmax的實(shí)驗(yàn)方

11、案，并做簡(jiǎn)要說(shuō)明。的實(shí)驗(yàn)方案，并做簡(jiǎn)要說(shuō)明。答：答：采用如下幾種實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定：①V~[S]作圖法；②LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法；③HanesWoolf作圖法；④EadieHofstee作圖法；⑤Eisenthal和CnishBowden直接線性作圖法。LineweaverBurk雙倒數(shù)作圖法：在一系列不同[S]下，測(cè)定蔗糖酶的V，以1V對(duì)1[S]作圖，得一直線（如下圖所示）。直線的斜率=KmVmax，在1V軸（縱軸）上

12、的截距是1Vmax，在1[S]軸（橫軸）上的截距是1Km。（寫出LineweaverBurk方程）11、試述、試述DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)（雙螺旋結(jié)構(gòu)（B結(jié)構(gòu)）的理論要點(diǎn)（結(jié)構(gòu)）的理論要點(diǎn)（哪種答法更好）哪種答法更好）答：答：（1）兩條反向平行的多核苷酸鏈（一條鏈的走向?yàn)?＇→3＇，另一條鏈的走向?yàn)?＇→5＇）圍繞同一中心軸形成右手雙螺旋；（2）磷酸和脫氧核糖形成的主鏈在外側(cè)，嘌呤堿和嘧啶堿在雙螺旋的內(nèi)側(cè)，堿基平面垂直于中軸，糖環(huán)平面平行于中軸