犢牛腹瀉病原菌分離鑒定及藥敏試驗_第1頁
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文檔簡介

1、1犢牛腹瀉病原菌分離鑒定及藥敏試驗國家肉牛牦牛產業(yè)技術體系崗位專家鄧立新摘要:商丘某肉牛養(yǎng)殖場大量犢牛發(fā)生腹瀉,為了研究引起犢牛腹瀉的病原菌,本試驗從商丘某肉牛養(yǎng)殖場無菌采集腹瀉犢牛的新鮮糞便,進行細菌的增菌培養(yǎng)、純化、質譜試驗和藥敏試驗。結果表明,分離的細菌在形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生化特性、耐藥性等方面與大腸埃希氏菌、沙門氏菌、克雷伯氏菌基本相同,通過質譜鑒定為大腸埃希氏菌、沙門氏菌和克雷伯氏菌。藥敏試驗結果表明該分離菌對氨卡西林、青霉

2、素等耐藥,對環(huán)丙沙星、頭孢吡肟、恩諾沙星等敏感。試驗結果為臨床用藥及預防提供了理論依據。關鍵詞:犢牛腹瀉;細菌分離鑒定;飛行時間質譜;藥敏試驗犢牛腹瀉是新生犢牛常發(fā)的一種急性腹瀉,引起犢牛腹瀉的病因很多,包括細菌、病毒、寄生蟲等病原微生物以及營養(yǎng)因素和環(huán)境因素等[1]。僅大腸埃希菌病造成的死亡,就占肉用犢牛死亡總數的75%,該病的發(fā)生嚴重影響著犢牛的生長發(fā)育和成年后的生產性能,給養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經濟損失[2]。此外,由于臨床中抗菌藥物的

3、大量應用,甚至濫用,導致了大腸埃希菌等細菌耐藥性的產生和擴散,給犢牛腹瀉病的防治造成了一定困難,而且動物源性帶耐藥質粒的腸道菌可通過畜禽產品的加工、食用等過程傳播到人類,對人類健康具有潛在性危害[3]。但由于近年來隨著質譜技術的快速發(fā)展,軟電離方式的出現(xiàn),基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜能夠對蛋白質、核酸及脂類等生物大分子進行快速、準確的分析,進而使得其被應用于細菌的檢測及鑒定[45]。本試驗從河南省民權縣某肉牛養(yǎng)殖場無菌采集腹瀉犢牛糞

4、便病料,進行病原分離,對分離菌株進行分離培養(yǎng)、鏡檢、生化試驗、藥敏試驗及飛行時間質譜試驗,希望為犢牛腹瀉病的防治提供依據。1材料與方法1.1材料1.1.1試驗地點、時間本試驗從2015年1月至4月間在河南農業(yè)大學微生物實驗室進行。1.1.2病料棉拭子無菌采集民權縣某肉牛場腹瀉犢牛糞便。1.1.3主要試劑藥敏片購自于杭州濱和微生物試劑有限公司,規(guī)格為5μg片、20片瓶,藥敏稀釋法所用的藥物由河南農業(yè)大學提供(青霉素鈉、頭孢噻呋鈉、頭孢吡肟

5、、氨卡西林鈉、硫酸慶大霉素、泰妙菌素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、阿莫西林、鹽酸四環(huán)素、氟苯尼考、多西環(huán)素),藥物濃度為512mgml;麥康凱培養(yǎng)基(MK),SS瓊脂培養(yǎng)基,普通肉湯培養(yǎng)基,普通瓊脂培養(yǎng)基,MHB瓊脂培養(yǎng)基,三糖鐵培養(yǎng)基,以上培養(yǎng)基均按常規(guī)方法配制[6]。95%酒精,革蘭氏染液,甲基紅,1%氫氧化鈉溶液等指示劑。1.1.4主要儀器設備顯微鏡(JnoecXS212202)、恒溫培養(yǎng)箱、烘干箱、高壓滅菌鍋、冰箱(海爾)等。1.2方法

6、1.2.1病料處理將采集的病料接種于普通肉湯培養(yǎng)基中在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12~24h。1.2.2細菌的分離培養(yǎng)3圖1藥敏試驗紙片擴散法圖2藥敏試驗稀釋法Fig1.SusceptibilitytestdiscdiffusionmethodFig2.Drugsensitivetestdilutionmethod2結果與分析2.1分離菌培養(yǎng)特性(1)分離菌1在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好,形成邊緣整齊、圓形、灰白色、半透明的菌落。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)

7、基上形成粉紅色、圓形、隆起、表面光滑、邊緣整齊的菌落。在SS瓊脂培養(yǎng)基上形成紫紅色菌落。革蘭染色鏡檢為陰性,兩端鈍圓的小桿菌(圖4)。(2)分離菌2在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長良好,形成圓形、表面光滑、無色半透明、邊緣整齊的菌落。在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上形成無色或淺黃色、圓形菌落。在SS瓊脂培養(yǎng)基上形成無色或黃色、圓形菌落。革蘭染色鏡檢為陰性,兩端鈍圓的短桿菌(圖3)。(3)分離菌3在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長形成圓形、隆起、表面光滑濕潤、豐厚黏稠的大

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