五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的原理及使用

1、五分類(lèi)血液分析儀原理及使用Hematologic Analyzers,血液分析儀,臨床血液一般檢查最常用儀器。50年代，美國(guó)庫(kù)爾特（W.H.Coulter）發(fā)明電子血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀并申請(qǐng)專利。 1982 年，Technicon 公司生產(chǎn)了 H6000 型血液細(xì)胞，分析儀器，應(yīng)該是首款具有白細(xì)胞五分類(lèi)能力的儀器。同時(shí)代日本日立公司推出圖像分析法的白細(xì)胞分析儀HITACHI 8200 型，僅僅是用于完成白細(xì)胞血片分類(lèi)的儀器，沒(méi)有其

2、他血細(xì)胞計(jì)數(shù)分析能力。,血液分析儀優(yōu)勢(shì)檢測(cè)項(xiàng)目多 速度快 精度高 易操作,血液細(xì)胞分析儀是醫(yī)院檢驗(yàn)科、化驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備之一，也是發(fā)展最快、應(yīng)用最普及的檢驗(yàn)儀器，當(dāng)前血液細(xì)胞分析儀分為三分群和五分類(lèi)兩種。國(guó)際市場(chǎng)上五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國(guó)家醫(yī)院血液臨床檢驗(yàn)的主流產(chǎn)品，但由于五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀需集光學(xué)、電子、氣路、液路、計(jì)算機(jī)等技術(shù)于一體，技術(shù)含量非常高，縱觀全球，也僅有美國(guó)、法國(guó)、日本等國(guó)家的 6 個(gè)廠家能

3、夠生產(chǎn)真正意義上的五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀。2006年 4 月深圳邁瑞 BC-5500推出之前，由于國(guó)內(nèi)沒(méi)有掌握該類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)制造的核心技術(shù)，因而在中國(guó)市場(chǎng)銷(xiāo)售的該類(lèi)產(chǎn)品由國(guó)外品牌所壟斷，價(jià)格都比較昂貴，導(dǎo)致該類(lèi)產(chǎn)品不能在中國(guó)醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中大范圍推廣應(yīng)用，BC-5500 的推出推動(dòng)了五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀在國(guó)內(nèi)的臨床應(yīng)用，提高整個(gè)國(guó)內(nèi)血液細(xì)胞檢測(cè)的臨床應(yīng)用水平。,一、常見(jiàn)血細(xì)胞分析儀品牌,1、庫(kù)爾特2、希思美康3、邁瑞4、雅培5

4、、光電6、拜耳7、……,二、五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)原理,（一）、儀器基本結(jié)構(gòu)1、機(jī)械系統(tǒng) 2、電學(xué)系統(tǒng) 3、光學(xué)系統(tǒng),（二）、分類(lèi)計(jì)數(shù)的基本原理,1、電阻抗的利用2、激光技術(shù)、射頻技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用,血細(xì)胞五分類(lèi)技術(shù)是一種綜合應(yīng) 用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計(jì)算機(jī)、細(xì)胞生物 學(xué)、免疫學(xué)等學(xué)科技術(shù)，讓被測(cè)溶液流經(jīng)測(cè)量區(qū)域 并逐一檢測(cè)其中每一個(gè)細(xì)胞的物理和化學(xué)特性從而對(duì) 高速流動(dòng)的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測(cè)定和

5、分析的 方法。它一秒鐘能分析幾千個(gè)細(xì)胞，并同時(shí)測(cè)定細(xì)胞 的多個(gè)參數(shù)。阻抗法也在五分類(lèi)血細(xì)胞儀中被采用，即所謂的鞘流阻抗法。,1、電阻抗原理，又稱庫(kù)爾特原理,孔電流 真空 內(nèi)電極 外電極

6、 - + 血細(xì)胞 懸液 標(biāo)

7、本杯,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,鞘流技術(shù)聯(lián)合電阻抗的應(yīng)用,2、激光技術(shù)、射頻技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用,五分類(lèi)儀器與三分類(lèi)儀器的主要區(qū)別在于：白細(xì)胞不再粗略地以大小來(lái)進(jìn)行分群，而是采用激光技術(shù)、組織化學(xué)技術(shù)、射頻技術(shù)等等來(lái)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。根據(jù)儀器廠家的不同，不同品牌的儀器采用了不同的分類(lèi)計(jì)數(shù)。,在激光技術(shù)中目前有半導(dǎo)體激光和氣體激光。半導(dǎo)體激光功率弱,但作為細(xì)胞分類(lèi)自己足夠;氣體激光功率強(qiáng)。二者比較

8、半導(dǎo)體激光具有壽命長(zhǎng)(7~10年)體積小,啟動(dòng)快,耗電小,對(duì)穩(wěn)壓要求低,更為經(jīng)濟(jì)適用等特點(diǎn)。,（1） 電阻抗、高頻電導(dǎo)及激光散射聯(lián)合檢測(cè)法即庫(kù)爾特公司的VCS技術(shù)。V:代表體積容量。電阻法微孔技術(shù)應(yīng)用于計(jì)數(shù)血細(xì)胞和測(cè)定其體積的大小。C:代表傳導(dǎo)性即電導(dǎo)(conductivity),指一束電磁波或稱射頻,穿透細(xì)胞的傳導(dǎo)性,它取決于細(xì)胞的大小和內(nèi)部結(jié)構(gòu);經(jīng)校正后的傳導(dǎo)性叫opacity即“不透明性”,這時(shí)不再反映細(xì)胞大小,而是反映細(xì)胞

9、內(nèi)部的結(jié)構(gòu),像核的大小,核漿比例和密度等。S:代表散射(scatter),指在不同角度測(cè)得的散射光強(qiáng)度。由于各類(lèi)細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)不同和顆粒大小不同而對(duì)光的散射各異,進(jìn)而區(qū)分各類(lèi)細(xì)胞。,容量、電導(dǎo)、光散射（volume，conductivity， scatter, VCS）法,原理細(xì)胞體積技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞大?。╇妼?dǎo)性技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)）光散射技術(shù)（測(cè)量細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核和細(xì)胞顆粒）。,,,,體積 電導(dǎo)

10、光散射,VCS可顯示3種細(xì)胞散點(diǎn)圖DF1（體積值和散射光值）DF2（體積值和電導(dǎo)值）DF3（體積值和電導(dǎo)值）,,儀器在單一通道上同時(shí)用這三種方法對(duì)同一白細(xì)胞進(jìn)行測(cè)量,避免了有些血液分析儀要設(shè)計(jì)好幾個(gè)通道或加染色試劑的麻煩。采用VCS技術(shù)的儀器主要是Coulter公司的STKS型、MAXM型以及Gen.s型五分類(lèi)血液分析儀。MAXM型和Gen.s型可計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞,Gen.s型可選配自動(dòng)制血片機(jī)。以上幾種型號(hào)還可直接計(jì)數(shù)CD4和

11、CD8淋巴細(xì)胞,并算出其比率。,（2）光散射和細(xì)胞化學(xué)染色聯(lián)合應(yīng)用,Bayer公司的的DVIA120型和2120型血細(xì)胞分析儀、Sysmex公司的SF-3000型、邁瑞的BC-5500血細(xì)胞分析儀均采用了該原理進(jìn)行工作。利用激光散射和過(guò)氧化物酶染色技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞分類(lèi)。利用光散射的原理計(jì)數(shù)血細(xì)胞,因細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)不同,在不同角度上散射光有差別,有助于對(duì)白細(xì)胞的區(qū)分。,白細(xì)胞化學(xué)染色 在稀釋液中加入過(guò)氧化酶(MPO)的底物及顯色劑

12、,根據(jù)白細(xì)胞對(duì)MPO的反應(yīng)分類(lèi)。中性細(xì)胞MPO為強(qiáng)陽(yáng)性,嗜酸性細(xì)胞陽(yáng)性更強(qiáng),單核細(xì)胞為弱陽(yáng)性,淋巴細(xì)胞陰性,嗜堿性細(xì)胞亦為陰性,故綜合光散射和細(xì)胞化學(xué)染色的特點(diǎn), 可得到二維或三維圖像-----不同顏色的散點(diǎn)圖。由于嗜堿性細(xì)胞不含此酶,不能被檢測(cè),因此一些儀器專門(mén)設(shè)置了嗜堿性細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng),它的測(cè)量通道采用時(shí)間差的方法,與RBC、PLT的測(cè)量系統(tǒng)共用一個(gè)通道。,（3）電阻抗和射頻電導(dǎo)聯(lián)合檢測(cè)法,這種方法是分別采用四個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)不同類(lèi)型

13、的細(xì)胞①淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入溶血?jiǎng)┦辜t細(xì)胞溶解,而使白細(xì)胞保持完整細(xì)胞漿及核形態(tài)近似于生理狀態(tài),當(dāng)這些細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)系統(tǒng)時(shí),對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行電阻抗法(測(cè)量細(xì)胞體積)和射頻電導(dǎo)法(檢測(cè)細(xì)胞核和顆粒密度)的聯(lián)合檢測(cè),結(jié)果將細(xì)胞分成淋巴細(xì)胞、單核細(xì)和中性粒細(xì)胞三個(gè)群體。,②嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞兩種檢測(cè)系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入特殊的溶血?jiǎng)?除嗜酸性細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞外,其他細(xì)胞均被溶解或萎縮再對(duì)保持完整的嗜酸性

14、細(xì)胞或嗜堿性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。③幼稚細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng):在細(xì)胞懸浮液中加入硫化氨基酸,由于占位不同,結(jié)合在幼稚細(xì)胞的氨基酸比成熟細(xì)胞多,且對(duì)溶血?jiǎng)┯械挚棺饔?當(dāng)加入溶血?jiǎng)r(shí),成熟細(xì)胞被溶解,只保留著可能存在的幼稚細(xì)胞用來(lái)計(jì)數(shù)。Sysmex公司的SE-9000血細(xì)胞分析儀就是采用這種方法進(jìn)行五分類(lèi)的。,電阻抗與射頻法能透入細(xì)胞內(nèi)，測(cè)量核的大小及顆粒的多少。,RF:射頻電流 細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)信息,DC:直流電 細(xì)胞大小的信息,（4

15、） 多角度激光偏振光散射檢測(cè)法,儀器使用鞘流液將標(biāo)本血稀釋,稀釋后白細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)近似于自然狀態(tài),只有嗜堿性細(xì)胞由于其吸濕的特性而使細(xì)胞結(jié)構(gòu)有輕微改變。紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白在高滲透壓的作用下,從細(xì)胞中分離出來(lái)。而鞘流的水分則進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完整,它與鞘流的折光系數(shù)相同,不影響白細(xì)胞的檢測(cè)。儀器同時(shí)從四個(gè)角度來(lái)檢測(cè)通過(guò)激光束的細(xì)胞所產(chǎn)生的散射光,因?yàn)榧?xì)胞大小、折射指數(shù)、核形、核漿比率以及顆粒性質(zhì)等,均可影響在不同角度測(cè)得的散射

16、光量。,0°：前角光散射（1°～3°），可粗略測(cè)定細(xì)胞大小。 10°：狹角光散射（7°～11°），可測(cè)定細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)相對(duì)特征。 90°：垂直光散射（70°～110°），測(cè)定細(xì)胞核分葉情況。 90°：消偏振光散射（70°～110°），區(qū)分嗜酸性粒細(xì)胞與其他細(xì)胞。,值得一提的是市面上偶見(jiàn)假五分類(lèi)血球儀。假五分類(lèi)血球儀

17、則不用上述原理分析血細(xì)胞成分,更多的使用電腦軟件的分析而得出五分類(lèi)結(jié)果。分辨是否真五分類(lèi)技術(shù)的血球儀，如果是試劑法,試劑不應(yīng)該少于四種,如果是激光法,試劑不少于三種。,三、五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的使用,1、自動(dòng)進(jìn)樣2、手工進(jìn)樣3、末梢血、靜脈血的可選性4、結(jié)果的判斷5、質(zhì)量控制6、儀器的校準(zhǔn) 準(zhǔn)品的來(lái)源、什么情況下需要校準(zhǔn)？如何校準(zhǔn)？7、儀器的維護(hù),標(biāo)本的重要性,1、高檔的儀器并不意味著結(jié)果一定可靠。2、標(biāo)本的采集直接關(guān)系

18、到結(jié)果的準(zhǔn)確性。 壓脈帶的使用時(shí)間、抗凝劑的影響、真空管的使用、血量的控制、標(biāo)本放置的溫度和時(shí)間、標(biāo)本的混勻等等。,檢驗(yàn)報(bào)告的審核,1、當(dāng)日質(zhì)控是否在控。2、比較報(bào)告各參數(shù)之間是否有矛盾。3、注意觀察多個(gè)測(cè)定標(biāo)本相關(guān)參數(shù)是否有一致的系統(tǒng)誤差。4、報(bào)告與臨床是否符合，不符合時(shí)可能存在的原因。如PLT過(guò)低、過(guò)高。5、什么樣的結(jié)果必須手工復(fù)查？如何復(fù)查？復(fù)查完畢后的報(bào)告簽發(fā)模式。6、直方圖、散點(diǎn)圖的利用。,血細(xì)胞自動(dòng)分析異

19、常結(jié)果人工顯微鏡復(fù)檢,1、鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀血細(xì)胞分析儀仍只能作為CBC 分析的一種過(guò)篩手段 ，當(dāng)遇到可疑情況 ，尤其是在病理?xiàng)l件下 ，其測(cè)定結(jié)果并不可靠 ，需要人工以顯微鏡復(fù)查 ，這已是不爭(zhēng)的事實(shí) 。但是 ，國(guó)內(nèi)目前各醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)CBC異常結(jié)果基不或很少進(jìn)行人工顯微鏡復(fù)查 ，這種現(xiàn)象在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的沿海地區(qū)更是普遍 。有資料顯示 ，國(guó)內(nèi)各醫(yī)院        CBC實(shí)際鏡檢率在0%

20、～15% ，大部分醫(yī)院鏡檢率< 5%或者不鏡檢 。這種現(xiàn)象引發(fā)了不少的醫(yī)療投訴 、糾紛或事故 。分析這類(lèi)題出現(xiàn)的原因可能有 : (1)認(rèn)識(shí)不夠 ，認(rèn)為血細(xì)胞分析儀尤其是五分群的血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果可靠 ，不需要復(fù)查 ； ( 2)工作量大 ； ( 3 )怕麻煩 ，圖省事 ； ( 4 )目前沒(méi)有一個(gè)可參照的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn) ，即對(duì)CBC結(jié)果的人工復(fù)查的標(biāo)準(zhǔn) 、內(nèi)容 、方法及程序尚無(wú)明確的規(guī)定 。,需要鏡檢的標(biāo)準(zhǔn)目前即使是最先進(jìn)的血細(xì)胞分析

21、儀也不能完全取代人工鏡下白細(xì)胞分類(lèi)。因此，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所使用的儀器型號(hào)、性能和實(shí)驗(yàn)室條件，制定出手工復(fù)檢方案，建立涂片復(fù)檢制度。只有在WBC、Hb、Plt均在正常范圍內(nèi)，細(xì)胞散點(diǎn)圖和直方圖均正常，儀器無(wú)報(bào)警顯示情況下，儀器分類(lèi)結(jié)果才可作為篩選數(shù)據(jù)報(bào)告。通過(guò)鏡檢達(dá)到的目的通過(guò)顯微鏡檢查，核實(shí)儀器出現(xiàn)的各類(lèi)報(bào)警是否真實(shí)存在，有無(wú)原始及幼稚細(xì)胞，有無(wú)血細(xì)胞形態(tài)異常，有無(wú)小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、微小血凝塊、巨大血小板、血小板聚集等，并估計(jì)白

22、細(xì)胞、血小板數(shù)量，必要時(shí)對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正后才能發(fā)出報(bào)告（如有核紅細(xì)胞存在時(shí)對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行校正）。,血細(xì)胞自動(dòng)分析與臨床的緊密結(jié)合,CBC檢測(cè)結(jié)果最終是用于臨床患者的診斷 、治療 、預(yù)后監(jiān)測(cè)或用于受檢者的健康狀況的評(píng)估 。因此 ，當(dāng)遇檢測(cè)結(jié)果異常時(shí) ，一方面可咨詢受檢者當(dāng)事人 /親屬或通過(guò)實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng) (L IS)查受檢者檢測(cè)記錄外 ；另一方面與臨床聯(lián)系非常重要 ，因?yàn)榕R床醫(yī)生更加了解受檢者 /患者的病情與實(shí)際情況 ，通過(guò)與臨床的聯(lián)系

23、，可了解并證實(shí)異常 CBC結(jié)果與患者病情的符合程度或因其他原因如輸液或患者標(biāo)本張冠李戴引起的CBC結(jié)果異常 ?？傊?，與臨床聯(lián)系可起到事半功倍的效果 。,1、血細(xì)胞直方圖 橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小 縱坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對(duì)頻率。,結(jié)果的判斷,白細(xì)胞直方圖,%,紅細(xì)胞直方圖,,,,,%,血小板直方圖直方圖在2～28fl（不同儀器不一）。,,,,10 20 30(fl

24、),,,,%,散點(diǎn)圖,1、白細(xì)胞直方圖正常白細(xì)胞直方圖,異常白細(xì)胞直方圖,,2、紅細(xì)胞直方圖（1）正常紅細(xì)胞分布：50～200fl （2）異常紅細(xì)胞直方圖,3、血小板直方圖正常血小板直方圖呈左偏態(tài)分布：2～30fl分布，主要在2～15fl。,異常血小板直方圖,血液分析儀,江蘇大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)技術(shù)學(xué)院　　　　　　　朱　偉,血細(xì)胞分析儀教學(xué)要求,掌握血細(xì)胞分析儀的概念、庫(kù)爾特原理、儀器的基本結(jié)構(gòu)。熟悉聯(lián)合檢測(cè)型血細(xì)胞分析儀器

25、的檢測(cè)原理，網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理，血紅蛋白檢測(cè)原理、儀器性能評(píng)價(jià)和維護(hù)。了解血細(xì)胞分析儀的分類(lèi)、性能指標(biāo)、常見(jiàn)故障和排除及進(jìn)展。,一、血細(xì)胞分析儀概述,血細(xì)胞分析儀(Blood cell analyzer,BCA)是指對(duì)一定體積全血內(nèi)血細(xì)胞異質(zhì)性進(jìn)行自動(dòng)分析的臨床檢驗(yàn)常規(guī)儀器。又稱血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀(ABCC)、血液學(xué)自動(dòng)分析儀(AHA)。ABCC代表早期的低檔次BCA，AHA外延過(guò)大。,,發(fā) 展 史 手工計(jì)數(shù)　　儀器

26、簡(jiǎn)單計(jì)數(shù)　　兩分群　　三分群　　五分群　　五分群＋網(wǎng)織紅,,20世紀(jì)40年代末， 電阻抗法微粒子計(jì)數(shù)專利50年代， Coulter Model A型用于臨床60年代， 測(cè)定參數(shù)達(dá)7項(xiàng)70年代， 全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）80年代， 雙通道、白細(xì)胞2~3分群、五分群90年代以來(lái)，多功能、多參數(shù)、流水線,,血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（Blood cell counter),Coulter principle ：微小粒子通過(guò)特殊的小孔時(shí)可產(chǎn)

27、生電阻變化，并根據(jù)這種電阻變化特點(diǎn)將其應(yīng)用于微小粒子的粒度測(cè)量和計(jì)數(shù)上。1953 年獲得美國(guó)發(fā)明專利,Wallance H. Coulter,昨天,血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,1958年，庫(kù)爾特電子（Coulter Electronics ）公司成立電阻式血細(xì)胞計(jì)數(shù)原理。單參數(shù)測(cè)定儀器，只能對(duì)血液中的紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，并且需人工切換。,昨天,日本東亞公司（SYSMEX）CC-1001,日本TOY公司1962 年生產(chǎn)的CC-1001 型血球

28、計(jì)數(shù)儀,昨天,血紅蛋白檢測(cè)功能的增加,具有單獨(dú)的血紅蛋白比色計(jì)，將加入專用的溶血?jiǎng)┖蟮臉颖具M(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)后再將其倒入血紅蛋白比色計(jì)， 即可得到比色法測(cè)定的血紅蛋白結(jié)果。當(dāng)時(shí)國(guó)內(nèi)使用最多的血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是Coulter ZF 型和血紅蛋白計(jì)。此時(shí)就能檢測(cè)MCV、HCT、MCH、MCHC。,昨天,1975 年日本東亞公司（TOA， Sysmex 的前身） 推出了包含以上7 個(gè)參數(shù)的全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器CC－710 和CC －720 型。,昨

29、天,血小板自動(dòng)計(jì)數(shù),儀器使用特殊離心速度將紅細(xì)胞和白細(xì)胞進(jìn)行沉淀，使上層血漿中盡量保存最為豐富的血小板，然后應(yīng)用這種PRP 血漿進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)。如Sysmex PA-701 型和CONTRAVE 1000 型，此類(lèi)儀器多配有專用PRP 離心機(jī)。右圖為T(mén)OA PLT-100 型血小板計(jì)數(shù)儀和離心機(jī)。,昨天,血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀血小板計(jì)數(shù)功能的增加,血細(xì)胞分析儀將血小板計(jì)數(shù)這一重要功能合并到全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC） 范圍內(nèi)。將血小板按體積大小

30、劃分到64 個(gè)通道，分別累加體積大小不同的血小板數(shù)量。除了給出血小板數(shù)量外，還提供了兩個(gè)新的參數(shù)，平均血小板體積(MPV) 和血小板體積分布寬度（PDW）。,昨天,Sysmex CC-800,白細(xì)胞分類(lèi)功能的增加,二分類(lèi)1970 年起Coulter 公司首先推出了兩分類(lèi)的S-PLUS 系列儀器。1980年又推出了T系列，都是可進(jìn)行白細(xì)胞兩分類(lèi)的儀器。Sysmex F800 和F820 型也是根據(jù)白細(xì)胞體積分布直方圖進(jìn)行粗略兩分群的

31、儀器。,昨天,Sysmex F820,三分群時(shí)代,經(jīng)過(guò)特殊溶血?jiǎng)┨幚淼陌准?xì)胞，在白細(xì)胞分布直方圖上出現(xiàn)兩個(gè)明顯的細(xì)胞分布峰。體積較小的一群細(xì)胞稱為淋巴細(xì)胞群（LYM）。右側(cè)體積較大的稱為粒細(xì)胞群（GRAN）。位于兩者之間的稱為中間細(xì)胞群（MID）， 中間細(xì)胞群一般指含有嗜酸粒細(xì)胞，嗜堿粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的細(xì)胞群。,今天,五分類(lèi)血液分析儀,BECKMEN COULTE：VCSABBOTT：MAPSS(多角度偏振光散射) ADVIA

32、：POXSYSMEX：核酸熒光染色,今天,血液細(xì)胞分析儀是醫(yī)院檢驗(yàn)科、化驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備之一，也是發(fā)展最快、應(yīng)用最普及的檢驗(yàn)儀器，當(dāng)前血液細(xì)胞分析儀分為三分群和五分類(lèi)兩種。國(guó)際市場(chǎng)上五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國(guó)家醫(yī)院血液臨床檢驗(yàn)的主流產(chǎn)品，但由于五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀需集光學(xué)、電子、氣路、液路、計(jì)算機(jī)等技術(shù)于一體，技術(shù)含量非常高，縱觀全球，也僅有美國(guó)、法國(guó)、日本等國(guó)家的 6 個(gè)廠家能夠生產(chǎn)真正意義上的五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀?！?/p>

33、　2006年 4 月深圳邁瑞 BC-5500推出之前，由于國(guó)內(nèi)沒(méi)有掌握該類(lèi)產(chǎn)品生產(chǎn)制造的核心技術(shù)，因而在中國(guó)市場(chǎng)銷(xiāo)售的該類(lèi)產(chǎn)品由國(guó)外品牌所壟斷，價(jià)格都比較昂貴，導(dǎo)致該類(lèi)產(chǎn)品不能在中國(guó)醫(yī)院臨床檢驗(yàn)中大范圍推廣應(yīng)用，BC-5500 的推出推動(dòng)了五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀在國(guó)內(nèi)的臨床應(yīng)用，提高整個(gè)國(guó)內(nèi)血液細(xì)胞檢測(cè)的臨床應(yīng)用水平。,一、常見(jiàn)血細(xì)胞分析儀品牌,1、庫(kù)爾特2、希思美康3、邁瑞4、雅培5、光電6、拜耳7、……,庫(kù)爾特COULTE

34、R GEN.S System,庫(kù)爾特5-diff 系統(tǒng),COULTER HmX血液分析儀,,SYSMEX XE-5000型五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀,,XT-1800i五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀,ABBOTT CELL-DYN3200五分類(lèi)血液分析,光電8222k血細(xì)胞分析儀,DIANA-5儀器,BC-5500五分類(lèi)血液細(xì)胞分析儀,二、儀器分型檢測(cè)原理,（一）血細(xì)胞分析儀分型按自動(dòng)化程度按檢測(cè)原理按對(duì)白細(xì)胞的分類(lèi)水平,電 阻 抗 法 血 細(xì)

35、胞 檢 測(cè) 原 理,二、儀器分型檢測(cè)原理,聯(lián)合檢測(cè)型原理,主要體現(xiàn)在白細(xì)胞分類(lèi)，實(shí)質(zhì)是選用較特異的方法將血中含量較少的嗜酸、嗜堿性粒細(xì)胞檢出，發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞。共有特點(diǎn)是：均使用了鞘流技術(shù)。,容量、電導(dǎo)、光散射檢測(cè)技術(shù),,,,光散射,電導(dǎo)性,電阻抗,每個(gè)細(xì)胞接受三維分析定義到三維散點(diǎn)圖的相應(yīng)位置,電導(dǎo)性(conductivity，C) 高頻電磁探針，測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，細(xì)胞內(nèi)核漿比例。體積(volume，V) 電阻抗原理測(cè)定細(xì)胞體積和數(shù)量

36、。光散射(scatter，S)細(xì) 胞內(nèi)粗顆粒的光散射強(qiáng) 度要比細(xì)顆粒更強(qiáng)。,光散射與細(xì)胞化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)技術(shù),這類(lèi)儀器是應(yīng)用激光散射與細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)計(jì)數(shù)。,返回本節(jié)目錄,白細(xì)胞分類(lèi)散射圖,聯(lián)合使用多項(xiàng)技術(shù)(流式、激光、射頻、電導(dǎo)、電阻抗、細(xì)胞化學(xué)染色)同時(shí)分析一個(gè)細(xì)胞，綜合分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，從而得出較為準(zhǔn)確的白細(xì)胞“五分群”結(jié)果。,返回本節(jié)目錄,網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測(cè)原理,,網(wǎng)織紅細(xì)胞中嗜堿性物質(zhì)RNA，在活體狀態(tài)下與特殊

37、的熒光染料結(jié)合熒光強(qiáng)度與RNA含量成正比用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 網(wǎng)織紅細(xì)胞大小和 RNA含量及血紅蛋 白的含量,二、儀器分型檢測(cè)原理,（五）血紅蛋白測(cè)定原理,除干式、無(wú)創(chuàng)型外，各型BCA對(duì)血紅蛋白測(cè)定都采用光電比色原理。血細(xì)胞懸液中加入溶血?jiǎng)┖?，紅細(xì)胞溶解釋放出血紅蛋白，后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白衍生物，進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng)。特定波長(zhǎng)(530～550nm)下進(jìn)行光電比色。,二、儀器分型檢測(cè)原理基本結(jié)構(gòu),溶

38、血素的作用原理,細(xì)胞膜表面脂質(zhì)成分的差異紅細(xì)胞膜表面含有較多的脂質(zhì)磷脂膽固醇成熟白細(xì)胞膜磷脂類(lèi)成分相對(duì)較少幼稚粒細(xì)胞膜磷脂類(lèi)成分更少溶血素的主要成分表面活性劑主要攻擊細(xì)胞膜的磷脂類(lèi)成分,儀器基本結(jié)構(gòu),機(jī)械系統(tǒng)電學(xué)系統(tǒng)血細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)血紅蛋白測(cè)定系統(tǒng)計(jì)算機(jī)鍵盤(pán)控制系統(tǒng),三、儀器的性能指標(biāo)、評(píng)價(jià)與調(diào)校,（一）血細(xì)胞分析儀的性能指標(biāo) 1.測(cè)試參數(shù) 2.細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析 3.測(cè)試速度 4.樣本量 5.精密度

39、與示值范圍 6.打印,血細(xì)胞分析儀的評(píng)價(jià),ICSH公布了電子血細(xì)胞分析儀的評(píng)價(jià)方案：在細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白測(cè)定方面，要評(píng)價(jià)儀器測(cè)試樣本的總變異、攜帶污染率、線性范圍、可比性和準(zhǔn)確性等,三、儀器的性能指標(biāo)、評(píng)價(jià)與調(diào)校,四、儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障,（一）儀器的維護(hù) 1.安裝： 潔凈的環(huán)境、穩(wěn)定的電源、可靠的接地、適宜的溫度和濕度是保證BCA正常工作的前提。,2.維護(hù)：良好的工作環(huán)境是儀器正常工作的前提，精心細(xì)致的維護(hù)是儀器處于

40、良好工作狀態(tài)的保證。做好儀器的維護(hù)保養(yǎng)，有助于提高儀器測(cè)量的準(zhǔn)確性，減少故障的發(fā)生，延長(zhǎng)儀器的使用壽命。,四、儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障,檢測(cè)器的維護(hù) ①采血順利②防止纖維絲堵孔③關(guān)機(jī)前對(duì)檢測(cè)器的微孔進(jìn)行清理沖洗④計(jì)數(shù)期間，及時(shí)按 “反沖”鍵，沖掉沉積變性的蛋白質(zhì)⑤定期卸下檢測(cè)器，用5%次氯酸鈉浸泡清洗,儀器的維護(hù)與常見(jiàn)故障,三、五分類(lèi)血細(xì)胞分析儀的使用,1、自動(dòng)進(jìn)樣2、手工進(jìn)樣3、末梢血、靜脈血的可選性4、結(jié)果的判斷5

41、、質(zhì)量控制6、儀器的校準(zhǔn) 準(zhǔn)品的來(lái)源、什么情況下需要校準(zhǔn)？如何校準(zhǔn)？7、儀器的維護(hù),標(biāo)本的重要性,1、高檔的儀器并不意味著結(jié)果一定可靠。2、標(biāo)本的采集直接關(guān)系到結(jié)果的準(zhǔn)確性。 壓脈帶的使用時(shí)間、抗凝劑的影響、真空管的使用、血量的控制、標(biāo)本放置的溫度和時(shí)間、標(biāo)本的混勻等等。,檢驗(yàn)報(bào)告的審核,1、當(dāng)日質(zhì)控是否在控。2、比較報(bào)告各參數(shù)之間是否有矛盾。3、注意觀察多個(gè)測(cè)定標(biāo)本相關(guān)參數(shù)是否有一致的系統(tǒng)誤差。4、報(bào)告與臨床

42、是否符合，不符合時(shí)可能存在的原因。如PLT過(guò)低、過(guò)高。5、什么樣的結(jié)果必須手工復(fù)查？如何復(fù)查？復(fù)查完畢后的報(bào)告簽發(fā)模式。6、直方圖、散點(diǎn)圖的利用。,血細(xì)胞自動(dòng)分析異常結(jié)果人工顯微鏡復(fù)檢,1、鏡檢復(fù)核的現(xiàn)狀　　　　血細(xì)胞分析儀仍只能作為CBC 分析的一種過(guò)篩手段 ，當(dāng)遇到可疑情況 ，尤其是在病理?xiàng)l件下 ，其測(cè)定結(jié)果并不可靠 ，需要人工以顯微鏡復(fù)查 ，這已是不爭(zhēng)的事實(shí) 。但是 ，國(guó)內(nèi)目前各醫(yī)院檢驗(yàn)科對(duì)CBC異常結(jié)果基不或很少進(jìn)行人工顯

43、微鏡復(fù)查 ，這種現(xiàn)象在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的沿海地區(qū)更是普遍 。有資料顯示 ，國(guó)內(nèi)各醫(yī)院CBC實(shí)際鏡檢率在0% ～15% ，大部分醫(yī)院鏡檢率< 5%或者不鏡檢 。這種現(xiàn)象引發(fā)了不少的醫(yī)療投訴 、糾紛或事故 。分析這類(lèi)題出現(xiàn)的原因可能有 : (1)認(rèn)識(shí)不夠 ，認(rèn)為血細(xì)胞分析儀尤其是五分群的血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果可靠 ，不需要復(fù)查 ； ( 2)工作量大 ； ( 3 )怕麻煩 ，圖省事 ； ( 4 )目前沒(méi)有一個(gè)可參照的執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn) ，即對(duì)CBC結(jié)果的

44、人工復(fù)查的標(biāo)準(zhǔn) 、內(nèi)容 、方法及程序尚無(wú)明確的規(guī)定 。,需要鏡檢的標(biāo)準(zhǔn)　　　目前即使是最先進(jìn)的血細(xì)胞分析儀也不能完全取代人工鏡下白細(xì)胞分類(lèi)。因此，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所使用的儀器型號(hào)、性能和實(shí)驗(yàn)室條件，制定出手工復(fù)檢方案，建立涂片復(fù)檢制度。只有在WBC、Hb、Plt均在正常范圍內(nèi)，細(xì)胞散點(diǎn)圖和直方圖均正常，儀器無(wú)報(bào)警顯示情況下，儀器分類(lèi)結(jié)果才可作為篩選數(shù)據(jù)報(bào)告。通過(guò)鏡檢達(dá)到的目的　　　通過(guò)顯微鏡檢查，核實(shí)儀器出現(xiàn)的各類(lèi)報(bào)警是否真實(shí)存在

45、，有無(wú)原始及幼稚細(xì)胞，有無(wú)血細(xì)胞形態(tài)異常，有無(wú)小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、微小血凝塊、巨大血小板、血小板聚集等，并估計(jì)白細(xì)胞、血小板數(shù)量，必要時(shí)對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正后才能發(fā)出報(bào)告（如有核紅細(xì)胞存在時(shí)對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行校正）。,血細(xì)胞自動(dòng)分析與臨床的緊密結(jié)合,CBC檢測(cè)結(jié)果最終是用于臨床患者的診斷 、治療 、預(yù)后監(jiān)測(cè)或用于受檢者的健康狀況的評(píng)估 。因此 ，當(dāng)遇檢測(cè)結(jié)果異常時(shí) ，一方面可咨詢受檢者當(dāng)事人 /親屬或通過(guò)實(shí)驗(yàn)室信息系統(tǒng) (L IS)查受檢者檢

46、測(cè)記錄外 ；另一方面與臨床聯(lián)系非常重要 ，因?yàn)榕R床醫(yī)生更加了解受檢者 /患者的病情與實(shí)際情況 ，通過(guò)與臨床的聯(lián)系 ，可了解并證實(shí)異常 CBC結(jié)果與患者病情的符合程度或因其他原因如輸液或患者標(biāo)本張冠李戴引起的CBC結(jié)果異常 ?？傊?，與臨床聯(lián)系可起到事半功倍的效果 。,結(jié)果判斷1、血細(xì)胞直方圖 橫坐標(biāo)為血細(xì)胞體積大小 縱坐標(biāo)為不同體積細(xì)胞的相對(duì)頻率。,,白細(xì)胞直方圖,%,紅細(xì)胞直方圖,,,,,%,血小板直方圖,