g試驗余進

1、,侵襲性真菌感染率上升—,,,Martin et al, NEJM 2003;348:1546,深部真菌感染不斷增加,國內深部真菌感染不容忽視,劉正印等，中華醫(yī)學雜志2003年3月第83卷第5期,國內情況,我院血液科(2004.5-2005.5共118例患者)確診和臨床診斷有7例,發(fā)生率為5.9%以血液病為主的深部真菌感染高?；颊咧校l(fā)生感染的危險因素有2種及2種以上廣譜抗生素應用、念珠菌菌落定植和應用尿管，其中廣譜抗生素應用是最主

2、要的危險因素,深部真菌感染,條件致病性真菌念珠菌病曲霉病隱球菌病其他,對于侵襲性真菌感染……,診斷滯后治療手段有限基礎疾病病死率很高念珠菌血癥若不治療死亡率可以達到45-76%侵襲性曲霉病死亡率高達55-70%,診斷方法,顯微鏡檢查培養(yǎng)血清學分子生物學,,鏡檢和培養(yǎng)方法,敏感性低 血培養(yǎng)：在腫瘤和血液病病人中，50%尸檢證實深部念珠菌感染的病例血培養(yǎng)陰性。培養(yǎng)結果陽性僅表示存在某種真菌，區(qū)分定植和感染

3、困難培養(yǎng)時間長有些標本采集困難,非培養(yǎng)方法優(yōu)點,快速報告結果敏感性提高取材簡便多以真菌在致病狀態(tài)產生的物質為檢測標志物，結果陽性提示有致病性定量檢測可判斷感染嚴重程度及療效評估,非培養(yǎng)診斷的方法簡介,真菌細胞壁成分（1-3） - β- D-葡聚糖檢測（G試驗） 真菌抗原檢查半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原（GM) 甘露聚糖(mannan)抗原隱球菌莢膜多糖抗原（乳膠凝集試驗）真菌特異的代謝產物

4、D-阿拉伯糖醇真菌 DNA 的檢測,深部真菌感染的診斷標準EORTC/MSG2008修訂版,宿主因素臨床特征病原學真菌鏡檢真菌培養(yǎng)組織病理學檢查血清學檢查方法（間接證據）CSF隱球菌抗原陽性——確診GM-test, G-test——臨床診斷,Clinical Infectious Diseases 2008; 46,（1-3） - β- D-葡聚糖檢測,（1-3） - β- D-葡聚糖檢測,真菌細胞壁成份，占50%以

5、上其他微生物、動物及人的細胞不含該成份用于侵襲性真菌感染的早期診斷,方法：G試驗,β-葡聚糖可特異性激活鱟（Limulus）變形細胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故稱G試驗。Beta-D-glucan 通過激活G因子（ Factor G）引起凝集內毒素通過激活C因子（Factor C）引起凝集試劑盒: 祛除Factor C ? Glucan 特異,BG檢測的特點,可檢測多種致病真菌感染念珠菌,曲霉,肺孢子菌,鐮刀菌,地

6、霉,組織胞漿菌,毛孢子菌等不能用于檢測隱球菌和接合菌感染陽性結果代表存在侵襲性真菌感染真菌對數生長期釋放量最大 ,可被體內葡聚糖酶降解(glucanase)每周檢測2次,BG檢測用于念珠菌血癥,敏感度為62%-100%，特異度為64%-88%不同種念珠菌感染對葡聚糖檢測無明顯影響白念珠菌,光滑念珠菌, 熱帶念珠菌,克柔念珠菌,季也蒙念珠菌和葡萄牙念珠菌近平滑念珠菌BG水平較低,Clin.Infect. Dis. 2005.

7、41:654–659.J. Clin. Microbiol. 2005.43:5957–5962J. Clin. Microbiol. 2008.46:1009–1013,BG檢測用于念珠菌血癥,BG檢測敏感度明顯高于Mannan檢測79.6%vs42%陽性早于血培養(yǎng)陽性和臨床癥狀出現(xiàn)對于念珠菌血癥, BG檢測是首選檢查,Clin.Infect. Dis. 2005.41:654–659.J. Clin. Microbiol

8、. 2005.43:5957–5962J. Clin. Microbiol. 2008.46:1009–1013,β-（1-3）-D-葡聚糖(BG)檢測用于侵襲性曲霉感染（IPA),敏感度為55%-100%特異度為52%-100%對于確診IPA，陽性率為85.7-100%高度可疑IPA，陽性率為52.4-66%,Med. Mycol. 2006.44:5163–5172J. Clin. Microbiol. 2008.46:

9、1009–1013J. Clin. Microbiol. 2005.43:299–305,BG檢測( 陽性界值為60pg/mL)和GM（陽性界值為1.0）比較二者在體內的代謝動力學相似，敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值均相同，分別為87.5%、89.6%、70%和96.3%二者聯(lián)合可以提高特異度和陽性預測值，對敏感度和陰性預測值沒有影響J Clin Microbiol, 2005, 43:299-305.,侵襲性曲霉感染（

10、IPA) BG檢測與半乳甘露聚糖(GM)檢測,BG檢測與半乳甘露聚糖(GM)檢測,BG檢測與GM檢測敏感度67%vs38%特異度90%vs100%感染曲霉種類的影響抗真菌藥物應用的影響抗生素應用的影響,BG檢測,對于煙曲霉和非煙曲霉感染無差別,J. Clin. Microbiol. 2008.published online,GM檢測,煙曲霉感染的敏感性明顯低于非煙曲霉感染,J. Clin. Microbiol. 2008.

11、published online,抗真菌治療對GM檢測的影響,抗真菌治療使GM檢測敏感性下降確診IPA的造血干細胞移植未接受抗真菌治療，GM試驗的敏感度為87.5%接受抗真菌治療，敏感度為20%應用卡泊芬凈后，GM值會出現(xiàn)升高BG檢測的敏感性與抗真菌治療無明顯關系,Clin.Infect. Dis. 2005.40:1762–1769.Clin.Infect. Dis. 2005.41:654–659.,抗生素治療對BG檢

12、測和GM檢測的影響,BG檢測假陽性與應用β內酰胺類抗生素無關Antimicrob. Agents Chemother. 2006.50:3450–3453.GM檢測哌拉西林/他唑巴坦導致假陽性,IPA的診斷方法,BG檢測GM檢測煙曲霉可能陽性率低二者聯(lián)合可以提高檢測的陽性率,BG檢測用于肺孢子菌檢測,BG是肺孢子菌包囊壁的組成成分可釋放入血液可用于肺孢子菌檢測,BG檢測,57名PCP患者238名非PCP患者敏感度9

13、2%，特異度86%陽性預測值0.61，陰性預測值0.96界值31.1pg/mLCHEST 2007;131:1173-1180,BG檢測,AIDS患者合并PCP陽性率為97%（31/32）非HIV感染合并PCPBG值仍舊較高,J. Infect. Chemother. 2007.13:1–7.J. Med. Microbiol. 2000.49:391–392.,BG檢測用于PCP診斷,敏感度好臨床一致性好數值升高

14、明顯，甚至高于念珠菌感染PCP( 1,299- 1,151 pg/ml; median, 945 pg/ml)念珠菌血癥 ( 700- 779 pg/ml; median, 447 pg/ml).,,J. Clin. Microbiol. 2008.46:1009–1013,其它深部真菌感染,鐮刀菌、組織胞漿菌、毛孢子菌、地霉、枝頂孢霉感染均可出現(xiàn)陽性對于接合菌和隱球菌均為陰性,J Med Vet Mycol, 1997, 35:

15、371-374. J. Clin. Microbiol. 2008.46:1009–1013J. Clin. Microbiol. 2008.published online,（1-3） - β- D-葡聚糖(BG)檢測方法,Fungitec-G (Japan)界值為20pg/mL Fungitell(US)界值為60pg/ mL或80pg/mL GKT-5M Set動態(tài)真菌檢測試劑盒 (國內金山川公司) 界值為20pg

16、/mL 或50pg/mL,Fungitec-GTM,20pg/mL41名確診IA患者中有37名陽性59名無真菌感染的腫瘤或結締組織病的對照中，無一例陽性 J Clin Microbiol, 1995, 33:3115-3118 202名發(fā)熱患者敏感度和特異度分別為90%和100%，陽性預測值為59%，陰性預測值為97% Lancet, 1995,345:17-20.,FungitellTM,60pg

17、/mL ，80pg/mL60pg/mL 敏感度70%，特異度87%80pg/mL敏感度64%，特異度92%,Clin Infect Dis, 2005, 41:654-659.,GKT-5M Set動態(tài)真菌檢測試劑盒,對于侵襲性念珠菌感染以健康人做對照敏感度88.9%, 特異度90.2%陽性預測值50%, 陰性預測值98.7%界值定為13.7pg/ml,中國真菌學雜志，2007，2（4）：202-206,GKT-5M S

18、et動態(tài)真菌檢測試劑盒,北京大學第一醫(yī)院2008年4月至2008年8月住院患者臨床懷疑侵襲性真菌感染的患者98例 50pg/mLBG≥50pg/mL15例，IFI組7例敏感度63.6%，陽性預測值46.7% BG＜50pg/mL83例，對照組79例特異度90.8%，陰性預測值為95.2%,敏感度,敏感度為63.6%IFI患者中有1例新型隱球菌肺炎，1例毛霉感染，1例疑似毛霉感染（培養(yǎng)出霉樣菌未鑒定，CT高度考慮）敏感性