赤潮藻無(wú)菌化體系的建立與一株特殊溶藻微生物的研究.pdf

1、赤潮是一種嚴(yán)重的全球性海洋災(zāi)害，對(duì)公眾健康、海洋環(huán)境、水產(chǎn)業(yè)和自然資源造成了嚴(yán)重負(fù)面影響。由于目前治理赤潮采取的物理和化學(xué)手段都存在著一些弊端，而生物防治方法因?yàn)橛兄踩⒔?jīng)濟(jì)、高效等特點(diǎn)受到關(guān)注，特別是利用微生物方法治理赤潮受到學(xué)者們的廣泛關(guān)注。
　　 本論文探索了固體平板培養(yǎng)藻的方法；改良了藻培養(yǎng)液除菌技術(shù)，成功獲得了三株無(wú)菌的藻培養(yǎng)體系：利用雙層平板法從廈門海域分離到了一株能裂解三角褐指藻的溶藻微生物——PTV1，利用三角

2、褐指藻的無(wú)菌培養(yǎng)體系純化了PTV1，并對(duì)其進(jìn)行了鑒定；探索了其溶藻方式、溶藻范圍及保藏方法；考察了PTV1的溶藻抑藻效果；研究了PTV1的溶藻過(guò)程及條件；獲得的主要結(jié)果如下：
　　 1．利用雙層平板培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的25株藻種，其中有13株藻種可以在固體平板上生長(zhǎng)，它們的藻細(xì)胞均較小（日本星桿藻除外），代表為單細(xì)胞綠藻：而其余12株藻種不能在固體平板上生長(zhǎng)，它們的藻細(xì)胞均較大，代表為單細(xì)胞甲藻。固體平板培養(yǎng)藻使溶藻微生物的分離程序更為

3、簡(jiǎn)便。
　　 2．有效的改良了藻培養(yǎng)液除菌技術(shù)。通過(guò)對(duì)藻細(xì)胞重復(fù)洗滌、SDS和抗生素處理嘗試除去藻培養(yǎng)液中的細(xì)菌。通過(guò)微生物培養(yǎng)和熒光顯微鏡觀察對(duì)處理后的藻培養(yǎng)液進(jìn)行無(wú)菌檢驗(yàn)，結(jié)果均表明沒(méi)有細(xì)菌的存在。這樣我們成功的獲得了三株無(wú)菌的藻培養(yǎng)體系，三角褐指藻的無(wú)菌培養(yǎng)體系（PT-d5）、自養(yǎng)小球藻的無(wú)菌培養(yǎng)體系(CA-d5)和球形棕囊藻的無(wú)菌培養(yǎng)體系(PG1-d5)。該法簡(jiǎn)單有效且耗時(shí)短，獲得的三株無(wú)菌藻可以在實(shí)驗(yàn)室基本培養(yǎng)條件下保

4、存，并進(jìn)行下一步研究。
　　 3．利用雙層平板法從廈門海域分離到了一株能裂解三角褐指藻的特殊溶藻微生物——PTV1，這是有關(guān)三角褐指藻溶藻微生物的首次報(bào)道。利用三角褐指藻的無(wú)菌培養(yǎng)體系，通過(guò)雙層平板法和終端梯度稀釋法純化了PTV1，并對(duì)其進(jìn)行了初步鑒定：PTV1被1μm微孔濾膜截留；經(jīng)過(guò)110g(1220rpm)、3000g（6380rpm）和19460g（13000rpm）離心5min后，活性均有所降低，分別是對(duì)照的39％、2

5、0%、10%;對(duì)氯仿敏感；用常規(guī)培養(yǎng)基和藻液培養(yǎng)基均不可培養(yǎng)，只有在活的藻體系中才可存活。
　　 4．PTV1通過(guò)直接接觸藻細(xì)胞殺藻，它對(duì)多種藻具有強(qiáng)烈的致死作用，通過(guò)不斷向PTV1和藻的共培養(yǎng)體系中添加新鮮藻液便可持續(xù)保持PTV1的高效感染性，利用雙層平板可保存PTV1兩個(gè)月，而在4℃、20℃、-20℃、-70℃避光保藏的效果均較差。
　　 5．溶藻過(guò)程中PTV1和藻細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化：PTV1加入藻液后，藻濃度先升高

6、，接著在一定濃度范圍內(nèi)波動(dòng)，然后降低；剛開(kāi)始PTV1含量下降，并維持在一個(gè)很低的水平，接著迅速升高，達(dá)到最高值后又迅速下降，然后又維持在一個(gè)很低的水平。
　　 6．不同培養(yǎng)條件下PTV1對(duì)三角褐指藻的溶藻效果：無(wú)論光照與否PTV1對(duì)藻都有殺滅作用，說(shuō)明PTV1裂解藻細(xì)胞時(shí)光照不是必要的；溫度、鹽度和pH對(duì)PTV1的溶藻效果影響不大，PTV1分別在20℃、鹽度35‰、pH9.5時(shí)溶藻效果最好。
　　 上述研究結(jié)果為分離篩選