人NMDA受體主亞基M3-M4環(huán)的原核表達、純化與鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該課題組通過生物信息學方法對人NMDAR主亞基(NR1)上受體激活相關(guān)多肽片段的理化特性、抗原性及自身免疫原性等進行分析之后,確定NR1膜蛋白胞外區(qū)M3-M4環(huán)靶片段更易成為NMDAR免疫干預的分子靶點.以此為靶點采用免疫干預的方法來調(diào)控NMDAR的激活狀態(tài),進而有望建立安全、可行的興奮毒性腦損害免疫防治的方法.人NR1膜蛋白M3-M4環(huán)靶片段是由163個氨基酸組成的多肽,相對分子質(zhì)量為18800,該研究采用基因工程方法獲得該肽段,以用

2、于進一步免疫原性及相關(guān)應(yīng)用研究,為興奮性腦損害免疫干預提供實驗基礎(chǔ).該研究以人腦膠質(zhì)瘤組織總RNA為模板,采用RT-PCR方法擴增出人NMDAR主亞基M3-M4環(huán)的基因片段,并成功構(gòu)建了原核表達載體pBV-NR1L3.同時,按照計算機輔助原核表達載體pBV220中外源基因高效表達的數(shù)學模型預測方法,將PCR引物進行優(yōu)化改構(gòu),從而實現(xiàn)了目的基因的高效表達,并對表達產(chǎn)物進行了純化和鑒定.凝膠掃描分析表達量約占菌體總蛋白29﹪,蛋白純度達95

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