基于FCM：急性早幼粒白血病細(xì)胞的微球免疫分析.pdf_第1頁
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1、山東輕工業(yè)學(xué)院碩士學(xué)位論文基于FCM：急性早幼粒白血病細(xì)胞的微球免疫分析姓名：張瑞華申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：發(fā)酵工程指導(dǎo)教師：蘭文軍20110607山東輕工業(yè)學(xué)院碩士學(xué)位論文IABSTRACTAPLisdiscoveredtobeassociatedwithareciprocaltranslocationbetweenPMLgenesinchromosomes15retinoicacidinchromosomes17.Thisrecip

2、rocaltranslocationleadstotheproductionofPMLRARαfusionproteinthatisAPLmarkermolecule.DetectionofPMLRARαaberrationsisimptanttoAPLdiagnosisclassificationtreatment.PMLRARαaberrationsarecurrentlydetectedbykaryotypingfluescenc

3、einsituhybridization(FISH)PCRtechniqueswhicharetimeconsuminghavemanyshtcomings.ThispaperdevelopedasimpleflowmicrosphereimmunoassayfdetectionofPMLRARαfusionproteinswithinNB4cell.Highlymonodispersepolystyrene(PS)microspher

4、eswitha3.5–7.0mdiameterweresynthesizedviadispersionpolymerization.Itwasobservedthat5.4mcarboxylatedpolystyrenemicrospherescanbesuccessfullypreparedwhenpolymerizationmixturecontaining6gstabilizer80gabsoluteenthanol1giniti

5、at0.3gcrosslinker21gstyrenewasreactedinthreemouthflaskatN2gasatmospheref12h.InmicrospheresconjugationexperimentthispaperstudiedtheeffectofthemountofEDCpHreactiontimeantibodyconcentrationontheconjugationofcaptureantibodyt

6、ocarboxylatedmicrospheres.Thisstudyelicitedthatcaptureantibodycanefficientlybindtocarboxylatedmicrosphereswhen20000microsphereswereincubatedwith1mgEDC1gcaptureantibodypH8.0f2h.InthisstudymicrospherescoatedwithantiPMLanti

7、body(captureantibody)cancaptureRARαpeptideepitopeinfusionproteinspecificallywhileaantiRARαantibodyasreptantibodycanrecogniseRARαpeptideepitopespecifically.UsingflowmicrospheresimmunoassaythevalueofPMLRARαfusionproteinwas

8、representedasPEmeanfluescencintensity(MFI)whichwasexaminedbyflowcytometer.Comparedtoonestepmethodmultistepsapproachtomicrospheresimmunoassayexhibitedthehighersensitivethemetimesavingacterics.Inonestepapproachthetopgallan

9、tvalueofproteinextractionreptantibodyreactiontimewas50L1.25L1hrespectively.ResultsfromthisstudydemonstratedthatflowmicrosphereimmunoassaycanefficientlydetectPMLRARαfusionproteinwithinNB4cells.thismethodmightbeusefulfAPLc

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