小鼠巨細(xì)胞病毒重復(fù)感染促進(jìn)疾病進(jìn)展.pdf

1、目的:
　　在整體水平觀察小鼠巨細(xì)胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV)重復(fù)感染(reinfection)對MCMV全身播散性感染小鼠模型各器官病理損害程度及病毒滴度的影響,初步探討其促進(jìn)疾病進(jìn)展的免疫學(xué)機(jī)制。
　　方法:
　　1、MCMV重復(fù)感染動(dòng)物模型的建立及標(biāo)本收集:將96只4周齡8-10g幼年雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分成4組,分別為正常對照組(簡稱M組,DMEM/H+DMEM/H)、單

2、次感染組(簡稱S組,DMEM/H+MCMV Smith)、兩次感染同株病毒組(簡稱SS組,MCMV Smith+MCMV Smith)、兩次感染不同株病毒組(簡稱SR組,MCMV Smith+MCMV RM461)。具體操作方法,給小鼠腹腔注射DMEM/H或者M(jìn)CMV Smith病毒懸液,于第1次注射后第5天再次腹腔注射DMEM/H、MCMV Smith或者M(jìn)CMV RM461病毒懸液,分別在第2次注射后的3d、7d、14d、28d無菌

3、取唾液腺、肺臟、心臟、肝臟、腎臟、脾臟組織標(biāo)本進(jìn)行檢測。
　　2、各臟器病理損害程度評估:取各組織臟器進(jìn)行石蠟切片和常規(guī)HE染色,不同臟器采用相應(yīng)的半定量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理損害程度評估。
　　3、各臟器感染性病毒滴度的檢測:采用標(biāo)準(zhǔn)蝕斑法檢測各組織臟器中的病毒滴度。
　　4、流式細(xì)胞術(shù)檢測Th1和Th2比率:收集各組脾臟,無菌分離脾細(xì)胞。采用滅活MCMV和PMA/I體外刺激培養(yǎng)6h后,流式細(xì)胞術(shù)檢測各組不同時(shí)間點(diǎn)脾細(xì)胞中Th

4、1(CD4+IFN-γ+)和Th2(CD4+IL-4+)細(xì)胞的比率變化。
　　結(jié)果:
　　1、感染后3d各組織臟器已出現(xiàn)明顯炎癥改變,除腎臟在感染后14d炎癥反應(yīng)最重外,余臟器組織在感染7d時(shí)最重,之后緩慢減輕,脾臟和唾液腺的病理損傷恢復(fù)最為迅速。總體而言,SS組和SR株組的炎癥改變程度較S組更嚴(yán)重。各感染組小鼠臟器的病變特點(diǎn)主要為:肺組織肺泡間隔增寬,肺泡間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤,肺泡內(nèi)可見出血,水腫,終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞脫落,毛

5、細(xì)血管充血,在終末細(xì)支氣管上皮細(xì)胞核內(nèi)可見包涵體;肝組織肝細(xì)胞氣球樣變性,嗜酸性變,點(diǎn)灶狀壞死,門管區(qū)炎性細(xì)胞浸潤,肝細(xì)胞核內(nèi)可見病毒包涵體;腎組織為腎小球內(nèi)細(xì)胞增多,腫脹,包曼氏囊變窄,腎間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤,可見腎小管上皮細(xì)胞壞死及上皮細(xì)胞核內(nèi)包涵體;心肌組織為心肌細(xì)胞水腫,溶解壞死,心肌間質(zhì)少量炎性細(xì)胞浸潤,心肌細(xì)胞核內(nèi)可見包涵體;脾臟次級淋巴細(xì)胞增生,吞噬細(xì)胞浸潤,白髓病理性增生,嚴(yán)重時(shí)紅髓和白髓結(jié)構(gòu)破壞、組織壞死;唾液腺中出現(xiàn)

6、炎性浸潤灶,嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)的破壞。
　　2、感染后3d,MCMV主要播散臟器中檢出感染性病毒,同期各組織臟器中病毒滴度以唾液腺最高,其次為肺臟組織,感染后7d,唾液腺和肺組織中病毒滴度達(dá)到峰值,隨后逐漸下降,于28d檢測不到。各時(shí)間點(diǎn)SS組和SR株組平均病毒滴度均高于S組,急性感染早期(3d)SR株組與SS組唾液腺滴度相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而余時(shí)間點(diǎn)SR株組與SS組之間無明顯差異。各感染組腎臟在7d時(shí)檢出病毒,S

7、組的病毒迅速被清除,14d檢測不出,而二次感染組感染后14d病毒滴度達(dá)到高峰,28d時(shí)測不到。肝臟組織在感染后3d檢出較低的病毒滴度,各感染組之間沒有明顯的差異。脾臟組織只在感染后3d的二次感染組偶有檢出,余時(shí)間點(diǎn)均未檢出。心臟各時(shí)間點(diǎn)均未檢出感染性病毒。
　　3、脾臟淋巴細(xì)胞中Th1(CD4+IFN-γ+)和Th2(CD4+IL-4+)細(xì)胞比率變化:在MCMV感染后3d、7d后,各感染組Th1(CD4+IFN-γ+)水平明顯高于

8、對照組,且SS組和SR株組均高于S組水平(P<0.05);在14d和28d時(shí),其水平迅速下降,與對照組比無明顯差異;在感染后3d、7d、14d,Th2(CD4+IL-4+)的水平均較低,在28d時(shí),SR株組Th2(CD4+IL-4+)細(xì)胞比率明顯升高,高于正常對照和其他感染組。
　　結(jié)論:
　　1、通過給BALB/c序貫注射Smith和RM461毒株可以成功建立小鼠的重復(fù)感染模型。
　　2、MCMV的重復(fù)感染能增加急性