桑樹根際微生物研究.pdf

1、選擇山東農(nóng)業(yè)大學(xué)蠶桑科研基地不同肥力的桑樹根際土壤，桑樹品種為湖桑32。采用三點(diǎn)取樣法，采集根際土樣。通過平板梯度稀釋培養(yǎng)，對(duì)不同肥力土壤桑樹根際細(xì)菌、真菌和放線菌進(jìn)行了分離和測(cè)數(shù)，研究了其數(shù)量變化。利用選擇性培養(yǎng)基對(duì)固氮細(xì)菌、解磷細(xì)菌和解鉀細(xì)菌進(jìn)行了分離篩選。采用細(xì)菌基因組重復(fù)序列PCR技術(shù)(簡稱mp-PCR．)，對(duì)根際細(xì)菌進(jìn)行了聚類分析。選用Shannom-Wener指數(shù)(H′)、豐富度指數(shù)(S)、Pielou均勻度指數(shù)(J)和Si

2、mpmn優(yōu)勢(shì)度指數(shù)(D)，分析了三類根際促生細(xì)菌的多樣性。采用菌體形態(tài)和菌落特征、生理生化特征和16S rDNA序列同源性分析對(duì)桑樹根琢促生細(xì)菌進(jìn)行了鑒定。運(yùn)用乙炔還原法(ARA')測(cè)定了圃氮細(xì)菌的固氮酶活性；通過測(cè)定菌落周圍產(chǎn)生的透明圈和混濁圈的大小，對(duì)解磷紐菌的解磷能力進(jìn)行了比較；采用火焰分光光度計(jì)測(cè)定了解鉀細(xì)菌的解鉀能力。主要結(jié)果如下。 不同肥力條件下，肥沃土壤桑樹根際細(xì)菌以及固氮細(xì)菌、解磷細(xì)菌、解鉀細(xì)菌和放線菌的數(shù)量均高

3、于貧瘠土壤，而根際真菌的數(shù)量低于貧瘠土壤：肥沃土壤桑樹根際氨化細(xì)菌、纖維素分解菌、硝化細(xì)菌、反硫化細(xì)菌的數(shù)量高于貧瘠土壤，而反硝化細(xì)菌與硫化細(xì)菌的數(shù)量低于貧瘠土壤。相同肥力條件下，桑樹根際解磷細(xì)菌的數(shù)量最多，解鉀細(xì)菌的數(shù)量次之，固氮細(xì)菌的數(shù)量最少。 根際細(xì)菌的rep-PCR基因指紋分析結(jié)果表明，在種的水平上，肥沃和貧瘠土壤根際細(xì)菌分別被分為71個(gè)和33個(gè)聚類群；肥沃土壤根際促生細(xì)菌分為33個(gè)聚類群，其中包括10個(gè)固氮細(xì)菌聚類群、

4、14個(gè)解磷細(xì)菌聚類群和14個(gè)解鉀細(xì)菌聚類群；貧瘠土壤根際促生細(xì)菌分為28個(gè)聚類群，其中包括11個(gè)固氮細(xì)菌聚類群、13個(gè)解磷細(xì)菌聚類群和10個(gè)解鉀細(xì)菌聚類群;通過rep-PcR基因指紋分析，得到固氮細(xì)菌18株，解磷細(xì)菌18株，解鉀細(xì)菌23株。 不同肥力條件下，肥沃土壤根際細(xì)菌、解磷細(xì)菌和解鉀細(xì)菌的多樣性、豐富度、均勻度指數(shù)均高于貧瘠土壤，而優(yōu)勢(shì)度指數(shù)低于貧瘠土壤：肥沃土壤固氮細(xì)菌的多樣性指數(shù)、均勻度和優(yōu)勢(shì)度指數(shù)較低，而豐富度指數(shù)較

5、高。這些結(jié)果說明，土壤肥沃程度對(duì)根際細(xì)菌的種類和數(shù)量均有影響，肥沃土壤適于多數(shù)細(xì)菌的生長繁殖，類群比較豐富，而貧瘠土壤由于缺乏營養(yǎng)物質(zhì)，只有少量生命力較強(qiáng)的類群可以定殖，優(yōu)勢(shì)度指數(shù)較高。桑樹根際促生細(xì)菌鑒定結(jié)果表明，固氮細(xì)菌以貪噬菌屬(Variovoraxsp．)為主，解磷細(xì)菌和解鉀細(xì)菌以假單胞菌屬(Pseudomonas sp．)為主，各菌株的16S rDNA序列已在GenBank上注冊(cè)。 桑樹根際促生細(xì)菌的生物活力測(cè)定結(jié)果顯