廣州市淡水產(chǎn)品中香港海鷗形菌的檢測(cè)和病原學(xué)研究.pdf

1、研究目的和內(nèi)容
　　 1.為了解目前廣州市淡水產(chǎn)品中香港海鷗形菌(Laribacter hongkongensis,LH)的攜帶情況,采集廣州市的淡水魚(yú)和食用蛙進(jìn)行LH檢測(cè)。
　　 2.為深入闡明LH的病原學(xué)特性,進(jìn)行以下研究:分析LH分離株抗生素耐藥表型；運(yùn)用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(pulsed field gel eleetrophoresis,PFGE)和腸道細(xì)菌重復(fù)基因間共有序列(enterobaeterial repe

2、titive intergenic consensus sequence,ERIC)PCR對(duì)分離株進(jìn)行分型分析,評(píng)價(jià)菌株間的遺傳親緣關(guān)系；分析LH分離株中整合子-基因盒在耐藥傳播中的作用,以及耐藥譜的遺傳多樣性。
　　 研究方法
　　 1.細(xì)菌培養(yǎng)分離鑒定方法。
　　 2.細(xì)菌16S rRNA基因PCR鑒定法。
　　 3.紙片擴(kuò)散法確定LH分離株的抗生素敏感性。
　　 4.建立PFGE和ERIC-

3、PCR分型的實(shí)驗(yàn)條件,對(duì)分離株進(jìn)行PFGE和ERIC-PCR分型；采用BioNumerics v4.0軟件中的非加權(quán)配對(duì)算數(shù)平均法(UPGMA)進(jìn)行聚類(lèi)分析,分析菌株的親緣關(guān)系。
　　 5.PCR擴(kuò)增法檢測(cè)LH分離株中的整合酶基因及基因盒,對(duì)基因盒進(jìn)行測(cè)序及比對(duì)分析。
　　 研究結(jié)論
　　 1.用尿素酶試驗(yàn)篩選LH菌株具有很高的靈敏度、特異度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值,是合理的首選生化試驗(yàn)。
　　 2.8種淡水魚(yú)中僅草

4、魚(yú)與鳙魚(yú)檢出LH,草魚(yú)的陽(yáng)性率為28.1％(66/235),鳙魚(yú)為11.1％(3/27)。春季草魚(yú)標(biāo)本的LH檢出率最高,最低為冬季。
　　 3.首次報(bào)道中國(guó)內(nèi)地6種食用蛙攜帶LH,其中牛蛙、沼蛙、黑框蟾蜍、棘胸蛙攜帶LH未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道?？傟?yáng)性率達(dá)49.5％(99/200),沼蛙陽(yáng)性率最高,最低為棘胸蛙。
　　 4.食用蛙LH檢出率高于淡水魚(yú)。
　　 5.所有的菌株至少對(duì)1個(gè)種類(lèi)的抗生素表現(xiàn)耐藥。大部分分離株對(duì)第一、

5、三代頭孢菌素(頭孢他啶除外)表現(xiàn)耐藥,而對(duì)第二、四代頭孢菌素表現(xiàn)較低的耐藥性。約2/3的分離株為多重耐藥株。
　　 6.PFGE和ERIC-PCR分型方法具有高重復(fù)性、高分辨率,均可作為L(zhǎng)H菌株的基因分型工具,以PFGE分型效果更好。
　　 7.從淡水產(chǎn)品分離的LH菌株,不僅耐藥譜型多樣,而且具有豐富的PFGE和ERIC基因型,表現(xiàn)相當(dāng)高的種內(nèi)基因多態(tài)性。
　　 8.13株LH分離株/nt//陽(yáng)性,并攜帶5種不同