PRRSV監(jiān)測技術(shù)平臺的建立及其在疫情預(yù)警系統(tǒng)中的初步應(yīng)用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的嚴重呼吸系統(tǒng)與繁殖障礙疾病，是目前影響?zhàn)B豬業(yè)健康發(fā)展的最重要疾病之一。當(dāng)前國內(nèi)外采用的PRRS檢測方法主要以ELISA及PCR為主。這些方法具有快速、省時等優(yōu)勢，但操作復(fù)雜、容易出現(xiàn)假陽性、假陰性。因此，建立一個快速、準確、高通量的檢測技術(shù)平臺用以PRRS流行預(yù)警至關(guān)重要。本論文以出入境生豬為研究對象，在前人的基礎(chǔ)上建立了兩種實時熒光PCR方法，并在國內(nèi)首次

2、建立、報道了PCR-DHPLC檢測方法，將其用于出入境生豬PRRS的監(jiān)控檢測，對PRRS預(yù)警體系的建立和應(yīng)用進行了探索，并在PRRS的防控中取得良好效果。
　　1.建立PRRSV SYBR GreenⅠ實時熒光PCR檢測方法
　　以PRRSV美洲株的GP5基因為靶基因，設(shè)計引物，調(diào)整PCR體系內(nèi)各組分及循環(huán)參數(shù)，最終建立PRRSV SYBR GreenⅠ實時熒光PCR檢測方法。該方法特異性好，與PCV-2、PRV、CSFV等

3、沒有交叉反應(yīng)；靈敏度高達10個拷貝；重現(xiàn)性良好，各重復(fù)樣品間擴增曲線擬合程度高。
　　2.建立PRRSV和HP-PRRSV雙重TaqMan實時熒光PCR方法
　　以美洲株P(guān)RRSV的N蛋白基因、HP-PRRSV的Nsp2基因為靶序列，設(shè)計2對引物、探針，分別建立美洲株P(guān)RRSV和HP-PRRSV的單一TaqMan探針實時熒光PCR檢測方法，并在此基礎(chǔ)上進一步研究建立了PRRSV和HP-PRRSV的雙重TaqMan探針實時熒光

4、PCR檢測方法，可以鑒別檢測缺失株與美洲株，特異性好，與PCV-2、PPV、CSFV、SIV、PRV和JEV等無交叉反應(yīng)；靈敏度高，PRRSV美洲株靈高達9.2個拷貝，HP-PRRSV高達56個拷貝；且重復(fù)性較好，批內(nèi)變異系數(shù)小于1％，批間變異系數(shù)小于3%。
　　3.首次建立PRRSV PCR-DHPLC方法
　　以PRRSV標準株的GP5基因為靶基因，分別設(shè)計克隆用引物和PCR-DHPLC檢測用引物，在國內(nèi)首次建立了PRR

5、SV PCR-DHPLC檢測方法，該方法特異性、重現(xiàn)性良好，靈敏度高達10個拷貝/單位，將其用于臨床檢測表明，PCR-DHPLC與Taqman探針Real-time PCR具有同樣的檢測靈敏度，能檢測出常規(guī)RT-PCR不能檢出的病料，具有較好的適用性。
　　4.所建立的檢測技術(shù)平臺在 PRRS流行預(yù)警中的應(yīng)用及出入境生豬 PRRS預(yù)警體系框架的建立
　　結(jié)合本研究所建立的SYBR GreenⅠ實時熒光PCR法、PRRSV和H