多不飽和脂肪酸及其聯(lián)合5-FU影響胃癌細胞生長的細胞生物學(xué)研究.pdf

1、研究背景和目的:近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)多不飽和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids，PUFAs）對抑制或者緩解各類慢性疾病的發(fā)生和發(fā)展都有極顯著的作用。然而各種慢性疾病之間存在著潛在的并發(fā)危險，而現(xiàn)階段對不飽和脂肪酸的研究只停留在對單一慢性疾病的影響，很少有關(guān)于多不飽和脂肪酸影響慢性疾病并發(fā)癥的研究。此外，對多不飽和脂肪酸的研究也局限在單獨的脂肪酸對各類慢性疾病的影響，沒有涉及到利用多不飽和脂肪酸優(yōu)良的生物

2、學(xué)活性聯(lián)合對人體有毒副作用的化學(xué)藥物來探索低毒治療的新途徑。本文就這兩個方面進行了初步的研究和探討:1、本文用具有代表性的多不飽和脂肪酸ALA（α-Linolenic Acid）、LA(linoleic acid)處理高糖高胰島素環(huán)境下的胃癌細胞，以氧化應(yīng)激為切入點，研究多不飽和脂肪酸對胃癌細胞的影響。2、PUFAs聯(lián)合傳統(tǒng)抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶(5-FU)處理胃癌細胞，研究聯(lián)合治療對胃癌細胞氧化應(yīng)激，遷移和代謝等的影響。
　　方

3、法:1、以正常胃細胞(GES-1)和胃癌細胞(MGC、SGC)為研究對象，建立高糖高胰島素環(huán)境，用多不飽和脂肪酸亞麻酸、亞油酸分別干預(yù)48h，MTT(Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide)法測定細胞存活率;流式細胞儀分析細胞凋亡情況;熒光法測定活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)含量;化學(xué)反應(yīng)法測定超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，SOD)活性和丙二醛

4、(Malondialdehyde，MDA)含量;用酶聯(lián)免疫法測定脂氧素(lipoxin4，LXA4)水平;2、以胃癌細胞為研究對象，5-FU處理組為實驗對照組，加入多不飽和脂肪酸干預(yù)48h后，MTT法測定細胞存活率，化學(xué)法測定超氧化物歧化酶活性、丙二醛積累量和一氧化氮分泌量;熒光法測定細胞線粒體膜電位;3、以胃癌細胞為研究對象，5-FU處理組為實驗對照組，加入多不飽和脂肪酸干預(yù)48h后，劃痕法觀察細胞遷移情況，酶聯(lián)免疫法測定新生血管相關(guān)

5、因子腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）和血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的分泌以及代謝相關(guān)因子過氧化物酶體增殖因子活化受體γ（Peroxisome proliferator-activated receptorγ，PPARγ），CCAAT增強子結(jié)合蛋白（CCAAT-enhancer binding protein α，CEBPA）和

6、脂蛋白脂酶(Lipoprotein lipase，LPL)的表達。
　　結(jié)果:1、ALA、LA使MGC、SGC的SOD活性顯著下降，MDA積累量顯著增加，ROS在細胞內(nèi)大量積累，兩株癌細胞均出現(xiàn)顯著凋亡，LXA4水平下降的現(xiàn)象。多不飽和脂肪酸能顯著增加自由基的積累，降低清除自由基的能力，引起癌細胞的氧化損傷，進而引發(fā)凋亡，具有抑制胃癌細胞在高糖高胰島素環(huán)境下生長的能力，同時保護正常細胞不受損害。2、6種多不飽和脂肪酸ALA、EPA