張力蛋白4在散發(fā)性結直腸癌中的表達及表觀遺傳學機制和臨床意義.pdf

1、博士學位論文( 專業(yè)學位)學校代碼：學 號：張力蛋白4 在散發(fā)性結直腸癌中的表達及表觀遺傳學機制和臨床意義1 0 0 2 3B 2 0 0 7 0 1 1T h e E x p r e s s i o n o f 1 ’e n s i n 4i nH u m a n S p o r a d i c C o l o r e c t a lC a r c i n o m aa n d i t sE p i g e n e t i cM e

2、c h a n i s m a n d t h eC U n i c a l S i g n i f i c a n c e： 北京協(xié)和醫(yī)院： 班宗文： 魯重美教授導師小組： 邱輝忠陳原稼教授學科專業(yè)： 內科學消化系病研究方向： 消化系統(tǒng)腫瘤完成日期： 2 0 1 0 年5 月院名師所姓導學院中國醫(yī)學科學院中文摘要博士研究生學位論文研究背景結直腸癌( C R C ) 是常見的惡性腫瘤，死亡率較高，復發(fā)和轉移是影響患者預后的主要原因，需要

3、發(fā)掘新的結直腸癌患者預后判斷的分子標記物。研究目的明確張力蛋白4 ( T N s 4 ) 在結直腸癌中的表達，初步探討調控其基因表達的表觀遺傳學機制；探討T N S 4 表達的臨床意義以及是否可作為結直腸癌預后判斷的分子標志物。實驗方法應用免疫組織化學染色及免疫印跡技術檢測1 3 9 例C R C 組織和其中9 5 例配對組織的T N S 4 蛋白表達，部分標本應用逆轉錄P C R ( R T - P C R ) 方法檢測m R N A

4、 的表達，同時檢測2 7 例腺瘤組織中該蛋白的表達。免疫印跡法及I m P C R 方法檢測1 5 株結直腸癌細胞中該蛋白及m R N A 的表達。分別用亞硫氫鹽修飾后克隆測序法( B S P ) 和甲基化特異性P C R ( M S P ) 方法檢測結直腸癌細胞和組織的啟動子區(qū)甲基化情況。對術后患者隨訪，收集患者復發(fā)、轉移和生存情況，采用單因素卡方分析和二分類L o g i s t i c 回歸分析對實驗數(shù)據(jù)與臨床病理學資料進行統(tǒng)計學

5、分析，應用K a p l a l l ．M e i e r 方法及C o x 回歸模型進行生存分析。實驗結果散發(fā)性結直腸癌組織中T N S 4 蛋白表達陽性率( 9 l ／1 3 9 例，6 5 ．5 ％) 顯著高于其在配對的瘤旁對照組織( 5 ／9 5 例，5 ．3 ％，P = 2 ．1 5 ×l O 。1 4 ) 以及腺瘤組織( 1 0 ／2 7 ；例，3 7 ％，P = O ．0 0 9 ) 中的表達；T N S 4m

6、R N A 在結直腸癌組織中的表達也顯著高于配對瘤旁組織( 9 ／1 6 例v sO ／2 5 例，J P = 8 ．3 0 ×1 0 。1 7 ) 。在人結直腸癌細胞系中，T N S 4 蛋白的表達與其啟動子區(qū)．1 3 6 ～+ 4 9 區(qū)域的低甲基化狀態(tài)顯著相關，而C R C組織中的甲基化狀態(tài)和去甲基化狀態(tài)都存在。T N S 4 蛋白表達和腫瘤的臨床分期顯著相關，其中I 期T N s 4 陽性率為3 4 ．8 ％、I I

7、期陽性率為5 5 ．3 ％、I I I 期陽性率為7 6 ．6 ％、Ⅳ期T N S 4 陽性率為9 5 ．2 ％。隨著分期的增加，其陽性率呈增高趨勢( 單因素分析膽5 ．2 6 ×1 0 ～，多因素分析P = 4 ．3 8 ×1 0 巧) ；有淋巴結轉移的C R C 組織中T N S 4 蛋白表達率顯著高于沒有淋巴結轉移的病例( 8 1 ％v s5 3 ％，單因素和多因素分析均為P = 0 ．0 0 1 ) ；術前有