NOK高表達(dá)肺腺癌細(xì)胞系的建立及其相關(guān)生物學(xué)特性研究.pdf

1、研究背景：
　　受體型酪氨酸蛋白激酶（RPTKs）在調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移、增殖、凋亡等一系列生理、生化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。2004年，劉力等報(bào)道了一個(gè)新的RPTK分子并命名為NovelOncogenewithKinase-domain（NOK），該分子能夠誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移。臨床研究發(fā)現(xiàn)，NOK在肺癌組織中存在高表達(dá)，且表達(dá)的高低和惡性程度相關(guān)，提示其可能參與了肺癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。但NOK對(duì)肺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及作用機(jī)制目前尚

2、無(wú)報(bào)道。
　　目的：
　　建立穩(wěn)定高表達(dá)NOK蛋白的A549-NOK細(xì)胞系，觀察NOK對(duì)A549細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，進(jìn)一步揭示NOK的生物學(xué)功能并為研究其作用機(jī)制及信號(hào)通路提供研究平臺(tái)。
　　方法：
　　運(yùn)用電穿孔儀將含NOK全長(zhǎng)基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA3.1/NOK）轉(zhuǎn)染入肺腺癌細(xì)胞株A549,穩(wěn)定篩選出的單克隆株命名為A549-NOK細(xì)胞，并用RT-PCR和Westernblot法對(duì)其

3、進(jìn)行驗(yàn)證。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡；MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；劃痕試驗(yàn)、細(xì)胞Transwell遷移試驗(yàn)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的遷移能力；細(xì)胞Matrigel侵襲試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的侵襲能力。
　　結(jié)果：
　　RT-PCR及Westernblot證明A549-NOK細(xì)胞中目的基因穩(wěn)定高表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)證明A549-NOK與A549、空質(zhì)粒對(duì)照組相比，S期細(xì)胞增多（51.7±2.2vs43.4±1.5、45.7±1.4，均P<0.0

4、5），細(xì)胞增殖指數(shù)升高（69.4±1.1vs58.4±1.3、57.9±1.4，均P<0.05），細(xì)胞凋亡比例減少（3.3％±0.7vs9.5％±0.8、11.8％±1.2，均P<0.05）；MTT結(jié)果顯示A549-NOK細(xì)胞較A549和空質(zhì)粒對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)曲線上移；劃痕試驗(yàn)顯示A549-NOK細(xì)胞的遷移速度加快；Transwell遷移試驗(yàn)中A549-NOK組的穿膜細(xì)胞數(shù)較A549及空質(zhì)粒對(duì)照組增多（95.7±9.5vs69.1±8.3