我國近10年肺結(jié)核發(fā)病率分析及結(jié)核分枝桿菌快速檢測方法研究.pdf

1、目的:
　　1.以省級行政區(qū)域?yàn)檠芯繉ο?，建?004-2012年全國31個?。ㄗ灾螀^(qū)、直轄市）肺結(jié)核地理信息數(shù)據(jù)庫，制作肺結(jié)核發(fā)病的專題地圖，并描述我國肺結(jié)核發(fā)病在時間、地點(diǎn)、人群的“三間分布”特征，確定2004-2012年我國肺結(jié)核高發(fā)區(qū)、高發(fā)期和高危人群，為部隊(duì)肺結(jié)核防控關(guān)鍵技術(shù)研發(fā)提供依據(jù)。
　　2.篩選結(jié)核分枝桿菌特異性的基因作為LAMP檢測的靶基因序列，設(shè)計(jì)并篩選特異性的引物，用檢測濁度法和鈣黃綠素染色法對該引物

2、的特異性與靈敏性測試，為部隊(duì)結(jié)核病現(xiàn)場快速檢測提供一種新的檢測與判斷方法。
　　方法:
　　1.近10年肺結(jié)核發(fā)病率分析
　　1.1.數(shù)據(jù)收集和處理的方法
　　利用中國疾病監(jiān)測信息報(bào)告管理系統(tǒng)，收集研究區(qū)域內(nèi)肺結(jié)核網(wǎng)絡(luò)報(bào)告數(shù)據(jù)和人口信息，利用Excel2010軟件，對數(shù)據(jù)進(jìn)行比對篩選和排序整理。
　　1.2利用ArcGIS9.0軟件，建立我國各省結(jié)核地理信息數(shù)據(jù)庫，從時間、空間、人群三方面，對我國結(jié)核發(fā)病分

3、布特征進(jìn)行描述性分析。
　　2.結(jié)核分枝桿菌快速檢測方法研究
　　2.1引物篩選
　　通過NCBI在線數(shù)據(jù)庫的檢索，選擇結(jié)核分枝桿菌的特異性保守序列IS6110為靶序列，并針對這一序列用軟件(PrimerExplorer4)設(shè)計(jì)特異性的LAMP引物，并篩選最佳引物。
　　2.2特異性評價
　　用篩選的最佳引物分別檢測結(jié)核分枝桿菌和非結(jié)核分枝桿菌，評價該引物檢測結(jié)核分枝桿菌的特異性。
　　2.3靈敏性評

4、價
　　將提取的結(jié)核分枝桿菌DNA進(jìn)行10倍梯度稀釋，用該引物進(jìn)行檢測，評價其靈敏性與傳統(tǒng)PCR方法的差異。
　　結(jié)果:
　　1.近10年肺結(jié)核發(fā)病率分析
　　1.1全國肺結(jié)核發(fā)病概況
　　2004-2012年我國31個省、直轄市和自治區(qū)，共報(bào)告肺結(jié)核發(fā)病病例9663，728例，死亡26，932例，十年來我國肺結(jié)核病例報(bào)告總體呈下降趨勢。
　　1.2全國肺結(jié)核空間分布情況
　　新疆肺結(jié)核年均發(fā)病

5、率為181.42/10萬居全國首位，貴州、海南、廣西、重慶、西藏、黑龍江六?。ㄖ陛犑小⒆灾螀^(qū)）年均發(fā)病率次之，北京、山東、上海和天津四?。ㄖ陛犑校┠昃l(fā)病率低于50/10萬。
　　1.3全國肺結(jié)核時間分布情況
　　從2004-2012年我國肺結(jié)核月均發(fā)病率來看，一、二季度肺結(jié)核發(fā)病率較高，三、四季度肺結(jié)核發(fā)病率較低，其中，1月和3月發(fā)病率較高且相近，自3月份起發(fā)病率逐月下降，12月發(fā)病率為一年中最低。
　　1.4全國肺

6、結(jié)核人間分布情況
　　肺結(jié)核患者中男性高于女性;從年齡分布上看，14歲以下人群年均發(fā)病率較低，老年人（60歲以后）年均發(fā)病率最高。從職業(yè)分布上看，我國肺結(jié)核發(fā)病主要以農(nóng)民為主。
　　2.結(jié)核分枝桿菌快速檢測方法研究
　　2.1最佳引物篩選
　　以結(jié)核分支桿菌IS6110基因序列為靶序列，設(shè)計(jì)5套LAMP引物為反應(yīng)引物，以結(jié)核分枝桿菌為模板在濁度儀中進(jìn)行LAMP反應(yīng)，結(jié)果顯示引物JH164組為最佳擴(kuò)增引物。

7、　　2.2JH164引物檢測結(jié)核分枝桿菌的特異性檢測實(shí)驗(yàn)
　　用JH164引物對14種細(xì)菌DNA進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，JH164引物具有良好的特異性。
　　2.3JH164引物檢測結(jié)核分枝桿菌靈敏性實(shí)驗(yàn)
　　用JH164引物分別用濁度法和鈣黃綠素染色法進(jìn)行檢測，檢測10倍梯度稀釋的結(jié)核分枝桿菌DNA，結(jié)果顯示，用JH164引物進(jìn)行LAMP結(jié)核分枝桿菌檢測的靈敏性是傳統(tǒng)PCR方法的10倍，最低檢測值為:101pg/μl。<

8、br>　　結(jié)論:
　　1.在過去的10年，我國肺結(jié)核發(fā)病率呈總體下降趨勢，但防控形勢依然嚴(yán)峻。我國肺結(jié)核病在新疆發(fā)病率最高，提示該地區(qū)結(jié)核病防控應(yīng)作為重點(diǎn)。從發(fā)病時間來看，我國肺結(jié)核發(fā)病多集中在一、二季度，提示此時為結(jié)核病多發(fā)季節(jié)，應(yīng)做好結(jié)核病防控措施。從人群角度來看，肺結(jié)核患者多為務(wù)農(nóng)者，以男性為主，老年人發(fā)病率較高。
　　2.用LAMP方法檢測結(jié)核分枝桿菌具有簡單、快速、特異性高、靈敏性好的特點(diǎn)，而且反應(yīng)在恒溫狀態(tài)下即可