LMWH-SOD的制備、二級(jí)結(jié)構(gòu)分析及其對(duì)腦缺血再灌注損傷防治作用機(jī)制研究.pdf

1、腦缺血再灌注損傷(Brain ischemia and reperfusion injury,BIRI)是由多種機(jī)制參與的由于腦缺血及再灌注導(dǎo)致的病理性過程,其中與活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)有密切關(guān)聯(lián)的氧化壓(Oxidative stress)的產(chǎn)生和白細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)是導(dǎo)致BIRI的兩個(gè)基本要素.為了改善天然SOD的理化性質(zhì)和生物學(xué)活性,增強(qiáng)其對(duì)BIRI的防治作用,我們采用LWMH對(duì)SOD

2、進(jìn)行化學(xué)修飾,在本課題研究中探討了修飾酶LMWH-SOD的制備、二級(jí)結(jié)構(gòu)及其血腦屏障通透性,此外,還研究了沙土鼠腦缺血再灌注過程中LMWH-SOD對(duì)于炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表達(dá)的影響.本研究取得的結(jié)果和結(jié)論主要有:(1)優(yōu)化了LWMH對(duì)SOD的修飾過程,實(shí)現(xiàn)了對(duì)LMWH-SOD的分級(jí)分離,獲得了在現(xiàn)有修飾條件下的最優(yōu)修飾產(chǎn)物L(fēng)MWH-SOD2.(2)首次運(yùn)用FTIR技術(shù)和CD光譜技術(shù)對(duì)LMWH-SOD的二級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行

3、分析,認(rèn)為LMWH對(duì)SOD的化學(xué)修飾增加了酶蛋白分子二級(jí)結(jié)構(gòu)中α-螺旋構(gòu)象,而對(duì)構(gòu)成酶活性中心同時(shí)也是分子二級(jí)結(jié)構(gòu)中優(yōu)勢(shì)構(gòu)象的β-構(gòu)象的影響很微弱(β-構(gòu)象比例稍有下降).(3)首次運(yùn)用Iodogen放射性碘標(biāo)記技術(shù)探討了LMWH-SOD透過血腦屏障的能力和在小鼠體內(nèi)分布情況,證明LMWH-SOD對(duì)腦缺血損傷鼠具有一定的血腦屏障透過能力,對(duì)正常動(dòng)物腦組織不具有通透性,同時(shí)發(fā)現(xiàn)LMWH-SOD具有腎臟分布特異性.(4)首次證明在蒙古沙土鼠