親和提取技術(shù)在檢測水產(chǎn)品中抗生素殘留的研究與應(yīng)用.pdf

1、水產(chǎn)品中抗生素殘留已經(jīng)威脅到公眾的食品安全和身體健康?？股貧埩舻臋z測方法有很多種,其中最為常用的方法有是微生物鑒定法、高效液相色譜法(HPLC-UV,HPLC-FLD)和高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法(HPLC-MSD)等,可以對抗生素殘留進行良好的定量和定性分析。由于水產(chǎn)品樣品的基體復(fù)雜,因此水產(chǎn)品中藥物殘留的檢測的關(guān)鍵是樣品前處理。其前處理方法如液液萃取、固相萃取(SPE)和基質(zhì)固相分散法(MSPD)等,操作繁瑣,極易造成殘留藥物的損失。

2、因此研究抗生素殘留在主要基體中的存在形態(tài)是發(fā)展前處理方法的前提。
　　在抗生素殘留檢測中蛋白質(zhì)是魚肉樣品的主要基質(zhì),研究顯示抗生素和蛋白質(zhì)有較強的結(jié)合作用,這種結(jié)合會降低抗生素的萃取效率。目前,蛋白質(zhì)對藥物萃取效率的影響尚未引起相關(guān)研究人員的注意,因此,抗生素和蛋白質(zhì)的結(jié)合作用應(yīng)該得到廣泛的關(guān)注,而如何把藥物從復(fù)雜基體中釋放出來成為提高萃取效率的的重中之重。
　　除此之外,抗生素在不同酸性條件下化學結(jié)構(gòu)的變化也會影響藥物的萃

3、取效率。
　　本文旨在通過熒光猝滅方法研究抗生素與蛋白質(zhì)的結(jié)合作用,闡明藥物在水產(chǎn)品樣品基質(zhì)中的存在狀態(tài),為藥物殘留的提取提供理論依據(jù)。并結(jié)合改進QuEChERS法、雙水相基質(zhì)去除法、弱酸提取法與液相色譜檢測技術(shù)建立了檢測魚肉樣品中四環(huán)素類藥物、磺胺類藥物、喹諾酮類藥物的方法。
　　論文主要分為五部分:
　　第一部分:綜述復(fù)雜樣品的前處理方法,并闡明了本課題的研究內(nèi)容和意義。
　　第二部分:本部分用熒光猝滅法與高

4、效液相色譜法(HPLC)研究了六種磺胺類抗生素(Sulfon amides,SAs)及磺胺增效劑甲氧芐胺嘧啶(Trimethoprim,TMP)在以蛋白質(zhì)為主要基質(zhì)的水產(chǎn)品中的存在狀態(tài),同時詳細討論了蛋白質(zhì)對提取水產(chǎn)品樣品中SAs及TMP殘留的影響。結(jié)果表明,SAs及TMP與蛋白質(zhì)有較強結(jié)合作用,體積分數(shù)為80％的四氫呋喃水溶液可引起蛋白質(zhì)緩慢變性、伸展,充分離解與其結(jié)合的SAs及TMP殘留。四氫呋喃水溶液萃取液中加入磷酸氫二鉀可形成四

5、氫呋喃-無機鹽-水雙水相體系,脂溶性的SAs及TMP可進入上相,實現(xiàn)藥物殘留的高效萃取。由于四氫呋喃水溶液的極性較大,萃取液中的脂溶性雜質(zhì)比常用的疏水溶劑液液萃取法少,因此,可以大大簡化凈化步驟。該方法用于水產(chǎn)品中六種SAs及TMP的快速測定,取得滿意結(jié)果?；厥章蕿?0.9~95.1%,相對標準偏差為1.9~5.9%,檢出限為6.3~23.7ng/g。
　　第三部分:該實驗用分子熒光法、高效液相色譜法探討了四環(huán)素類藥物(TCs)在

6、以蛋白質(zhì)為主要基質(zhì)的水產(chǎn)品中的存在狀態(tài)和硫酸銨對蛋白質(zhì)變性的影響,并應(yīng)用了紫外分光光度法研究了四環(huán)素在不同pH條件下分子結(jié)構(gòu)的變化,根據(jù)以上的實驗結(jié)果應(yīng)用硫酸銨做為萃取劑提取四環(huán)素藥物。結(jié)果表明,四環(huán)素與蛋白質(zhì)有較強結(jié)合作用。濃度為0.4~1.6mol/L硫酸銨-流動相溶液可引起蛋白質(zhì)伸展變性利于釋放結(jié)合的藥物,在提取蛋白質(zhì)基質(zhì)中的四環(huán)素時回收率較高。本文以硫酸銨-流動相溶液提取水產(chǎn)品樣品中的四環(huán)素藥物,以PSA和NH2為混合顆粒吸附劑

7、,經(jīng)離心分離去除基質(zhì)后萃取液過0.45μm濾膜直接進樣測定了水產(chǎn)品中的土霉素(OTC)、四環(huán)素(TC)、金霉素(CTC)、強力霉素(DC),測定回收率為88.3%~95.4%,RSD為1.3%~4.9%,檢出限為14.8~39.2ng/kg,方法操作步驟簡單、快速、高效。
　　第四部分:本文用瑞利散射法和高效液相色譜法(HPLC)研究了蛋白質(zhì)在不同種類不同濃度弱酸作用下的結(jié)構(gòu)的變化,以此為理論基礎(chǔ)探討了在以蛋白質(zhì)為基體的水產(chǎn)品中喹

8、諾酮類藥物(Quinolones,QNs)殘留在不同弱酸條件下的提取率,QNs與蛋白質(zhì)有較強結(jié)合作用,適當濃度的檸檬酸水溶液可引起蛋白質(zhì)緩慢且完全變性,導(dǎo)致蛋白質(zhì)與QNs絡(luò)合物離解,釋放結(jié)合的藥物,從而提高蛋白質(zhì)樣品中QNs殘留提取的效率。該方法用于測定水產(chǎn)品中的依諾沙星(enoxacin,ENX),諾氟沙星(norfloxacin,NOR),環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin,CIP),洛美沙星(lomefloxacin,LOM),

9、恩諾沙星(enrofloxacin,ENR),加替沙星(gatifloxacin,GAT)的回收率為81.5%~96.2%,RSD為1.9%~5.9%,檢出限為5.5~15.8ng/g。方法步驟簡單、可靠、綠色環(huán)保,可很好地應(yīng)用于水產(chǎn)品種的喹諾酮類藥物殘留的快速檢測。
　　第五部分:實驗研究了乙腈-NaCl-H2O雙水相體系的分相條件及在吡咯烷二硫代氨基甲酸銨(APDC)做絡(luò)合劑時對銅和鉛的萃取行為,并結(jié)合電感耦合等離子體原子發(fā)射