NSPc1基因及其編碼蛋白質(zhì)的生物學功能初探.pdf

1、NSPc1是最近發(fā)現(xiàn)的PcG家族成員,到目前為止,關(guān)于NSPc1的文獻僅有一篇.2001年,Nunes<'[6]>等人報道NSPc1基因定位于2p13.1——帕金森疾病(PARK3)的候選基因區(qū)域內(nèi),其cDNA全長904bp,推導其編碼一個具有247個氨基酸的蛋白質(zhì),理論分子量為29.2KD,蛋白N端有一個環(huán)指結(jié)構(gòu)域(RING finger domain).NSPc1的mRNA在發(fā)育早期的神經(jīng)系統(tǒng)特異的高表達.由于NSPc1與哺乳動物P

2、cG家族中的Mel-18、Bmi-1基因具有較高同源性,且在發(fā)育早期的神經(jīng)系統(tǒng)特異的高表達,故被命名為Nervous System Polycomb-1.前期工作中,我室已從3月人胎腦文庫中成功克隆了NSPc1基因.為深入研究該基因在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育與疾病過程中可能的作用,我們首先對NSPc1進行了生物信息學分析,比較人和大鼠、小鼠的NSPc1核苷酸序列發(fā)現(xiàn),三者的相似性非常高,但已報道的大鼠核苷酸序列的N端較人和小鼠缺少一段序列,于是我

3、們從大鼠腦組織mRNA的RT-PCR產(chǎn)物中擴增獲得了NCBI序列庫中尚不完整的大鼠全長Nspc1序列.接著,構(gòu)建hNSPc1原核表達質(zhì)粒,用原核表達并經(jīng)純化的hNSPc1蛋白免疫新西蘭大白兔,得到抗hNSPc1多克隆抗體.應(yīng)用Western Blot檢測hNSPc1蛋白在大鼠、小鼠各組織中的表達情況,并用組織免疫化學方法分析了hNSPc1蛋白在正常大鼠的腦組織中的分布特點.實驗結(jié)果表明hNSPc1蛋白在大、小鼠的神經(jīng)系1統(tǒng)相對高表達,在

4、正常大鼠的腦組織中廣泛表達.另外,我們應(yīng)用細胞免疫熒光技術(shù)檢測了多種哺乳動物細胞系中內(nèi)源hNSPc1的亞細胞定位.還同時構(gòu)建了pEGFPN1-hNSPC1融合表達質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染HeLa細胞和SH-SY5Y細胞,觀察pEGFPN1-hNSPC1融合蛋白過表達后的亞細胞定位.結(jié)果發(fā)現(xiàn)hNSPc1主要分布于細胞核中.綜上所述,我們分離和克隆了NCBI序列庫中尚不完整的大鼠全長Nspc1序列.第一次從蛋白水平描述了hNSPc1在組織與細胞內(nèi)的分布特