PD-L1在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的生物學(xué)作用及臨床意義.pdf

1、隨著人類生存環(huán)境的惡化，惡性腫瘤成為世界上致死率最高的疾病之一，肺癌的發(fā)病率及致死率居所有惡性腫瘤之首。肺癌可以分為非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)。其中NSCLC約占肺癌總數(shù)的80％-85%，NSCLC中的肺腺癌占比逐年升高。其病情發(fā)展迅速，轉(zhuǎn)移速度快，大部分病人發(fā)現(xiàn)時(shí)已發(fā)展至中晚期，手術(shù)機(jī)會(huì)少，術(shù)后復(fù)發(fā)率高，預(yù)后差，

2、晚期患者的5年生存率不足15%，肺腺癌已經(jīng)成為了臨床治療的難點(diǎn)。目前化療和分子靶向治療均遇到了瓶頸，為了提升患者的治療效果和延長(zhǎng)其生存時(shí)間，探求新的更為有用的治療方法有著非常重要的臨床意義。免疫卡控點(diǎn)抑制劑很有可能成為肺癌常規(guī)治療的重要組成部分，聯(lián)合靶向和免疫治療將是未來(lái)的一種新型治療模式。本研究試圖探討這兩種治療方法的目標(biāo)靶點(diǎn)之間的聯(lián)系和相關(guān)性，為將來(lái)的聯(lián)合治療模式尋求治療依據(jù)和目標(biāo)人群。
　　免疫卡控點(diǎn)(Immune chec

3、kpoints)的重要成員，如 B7家族負(fù)性協(xié)同刺激分子，PD-L1、B7-H3、B7-H4等，可異常表達(dá)于諸多人類腫瘤組織及腫瘤浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞中，參與腫瘤免疫逃逸并與患者的臨床病理參數(shù)及預(yù)后密切相關(guān)，是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分。它們一方面通過(guò)負(fù)性調(diào)控T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤應(yīng)答，另一方面通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞自身的生物學(xué)行為，共同參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。研究表明，PD-L1可作為肺癌治療的重要免疫干預(yù)靶點(diǎn)。但是，截至目前，PD-L1在肺癌中異常表達(dá)

4、的臨床意義、生物學(xué)功能及作用機(jī)制亟待深入探討。本文首先通過(guò)RNAi技術(shù)、慢病毒感染、流式分選、細(xì)胞增殖、劃痕試驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期及凋亡分析、T細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)等系列研究，論證肺癌細(xì)胞株異常表達(dá) PD-L1的生物學(xué)作用；其次，結(jié)合肺腺癌術(shù)后的臨床病例進(jìn)行回顧性研究，探討肺腺癌患者EGFR及KARS突變情況、PD-L1及PD-1表達(dá)水平等重要生物學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性，以期了解肺腺癌免疫卡控點(diǎn)干預(yù)聯(lián)合靶向治療對(duì)患者預(yù)后的影響，為尋

5、求肺癌綜合治療模式奠定基礎(chǔ)。
　　本研究結(jié)果顯示：(1)免疫卡控點(diǎn)PD-L1在肺癌細(xì)胞株中高表達(dá)，我們通過(guò)RNAi技術(shù)、慢病毒感染、流式分選技術(shù)，在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549（腺癌），SK-MES-1（鱗癌）中成功構(gòu)建了 PD-L1下調(diào)表達(dá)的模型；(2)細(xì)胞增殖、劃痕試驗(yàn)、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞周期及凋亡分析等研究結(jié)果表明，免疫卡控點(diǎn)分子 PD-L1在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549，SK-MES-1中下調(diào)表達(dá)后，均顯著抑制上述細(xì)胞系的增殖能

6、力、遷移能力、侵襲能力，并可導(dǎo)致細(xì)胞周期阻滯；(3)鑒于靶向治療在肺癌中的重要作用，我們同時(shí)檢測(cè)了免疫卡控點(diǎn)分子PD-L1在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549，SK-MES-1中下調(diào)表達(dá)后EGFR的基因表達(dá)水平，結(jié)果顯示PD-L1在A549，SK-MES-1中下調(diào)表達(dá)后，EGFR的基因表達(dá)水平顯著下調(diào)；(4)我們進(jìn)一步收集100例肺腺癌患者手術(shù)后石蠟組織樣本，免疫組織化學(xué)檢測(cè) PD-L1的表達(dá)水平，分析其臨床意義并回顧性分析其預(yù)后價(jià)值，結(jié)果表明PD-L

7、1低表達(dá)60例(60/100，60%)，PD-L1高表達(dá)40例(40/100，40%)，我們發(fā)現(xiàn)肺癌組織中 PD-L1表達(dá)水平與患者預(yù)后成顯著負(fù)相關(guān)(P=0.032)，與其它臨床病理參數(shù)無(wú)顯著相關(guān)性；(5)我們進(jìn)一步運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)其EGFR基因突變情況檢測(cè)，結(jié)果表明PD-L1低表達(dá)患者中EGFR突變?nèi)藬?shù)為42人(42/60，70%)；PD-L1高表達(dá)患者中EGFR突變?nèi)藬?shù)為18人(18/40，45%)。PD-L1表達(dá)水平、

8、病理分期、EFGR突變狀態(tài)可以作為肺腺癌患者的一個(gè)獨(dú)立預(yù)后因素。(6)我們進(jìn)一步通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)100例肺癌患者中PD-1的表達(dá)水平，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)其KRAS基因突變情況，結(jié)果表明，PD-1低表達(dá)47人(47/100，47%)，PD-1低表達(dá)患者中KRAS突變?nèi)藬?shù)為8人(8/47，17%)；PD-1高表達(dá)53人(53/100，53%)，PD-1高表達(dá)患者中KRAS突變?nèi)藬?shù)為2人(2/53，3.8%)，PD-1的表達(dá)與

9、KRAS突變呈負(fù)相關(guān)。
　　綜上所述，我們探討了免疫卡控點(diǎn)分子 PD-L1在肺癌中表達(dá)的生物學(xué)作用及臨床意義，證實(shí)了免疫卡控點(diǎn)分子PD-L1可以通過(guò)調(diào)控肺癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞周期調(diào)控等途徑參與促進(jìn)肺癌的發(fā)生與進(jìn)展。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)肺癌靶向治療的重要靶點(diǎn)EGFR基因的突變情況與PD-L1表達(dá)水平及患者預(yù)后密切相關(guān)。肺腺癌的靶向治療以及基于 PD-L1的免疫治療，將為未來(lái)肺腺癌綜合治療模式提供新思路和新策略，具有重要的臨