中國漢族人群D1S1677-D2S441-D4S2364-D10S1248-D22S1045 miniSTR基因座的遺傳多態(tài)性及法醫(yī)學(xué)應(yīng)用.pdf

1、目的：短串連重復(fù)序列(STR．)遺傳標(biāo)記系統(tǒng)，由于在人類基因組中分布廣泛，并具有高度的遺傳多態(tài)性及簡單快捷的檢測方法而被廣泛應(yīng)用于法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。目前應(yīng)用常染色體STR基因座和線粒體DNA等遺傳標(biāo)記已能夠解決大部分個(gè)體識別和親權(quán)鑒定案例。然而，當(dāng)DNA樣本由于各種原因而高度降解時(shí)，應(yīng)用目前常規(guī)的STR檢測技術(shù)經(jīng)常會出現(xiàn)大片段等位基因丟失的現(xiàn)象，難以得到完整的DNA分型。線粒體DNA(mtDNA)高度變異區(qū)的分析雖已較為廣泛應(yīng)用，但由于單倍

2、體和母系遺傳的特征，以及檢測方法繁瑣且成本較高，其應(yīng)用具有一定的局限性。MiniSTR基因座分析技術(shù)是通過將PCR引物的設(shè)計(jì)盡可能靠近重復(fù)區(qū)域而縮短擴(kuò)增片段長度的一種新方法，應(yīng)用于高度降解DNA樣本檢測，可提高檢測成功率。MiniSTR基因座被歐洲D(zhuǎn)NA分型工作組(EDNAP)定義為繼STR之后的新一代遺傳標(biāo)記。美國、日本、西班牙等國家也相繼報(bào)道了對D1S1677，D2S441，D4S2364，D10S1248，D22S1045等五個(gè)m

3、iniSTR基因座的群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)及其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值，而我國相關(guān)報(bào)道較少并缺乏群體遺傳學(xué)數(shù)據(jù)。本研究選取D1S1677，D2S441，D4S2364，D10S1248，D22S1045等五個(gè)miniSTR基因座，調(diào)查其在中國漢族人群中的遺傳多態(tài)性，并探討其法醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。 方法：采用clielex 100法提取115份中國漢族無關(guān)個(gè)體全血基因組DNA。將D1S1677，D4S2364，D10S1248，D22S1045四個(gè)基因座的

4、上游引物5’端用6-FAM熒光標(biāo)記，D2S441基因座的上游引物用VIC熒光標(biāo)記，對所有樣本的五個(gè)miniSTR基因座進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中D2S441與D10S1248兩個(gè)基因座進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，其余基因座單體系擴(kuò)增。PCR產(chǎn)物在ABI3100 Avant基因分析儀上電泳分型，結(jié)果用GeneScan3.7及Genotyper3.7軟件進(jìn)行分析，利用計(jì)數(shù)法計(jì)算基因頻率及遺傳多態(tài)性參數(shù)。選取既往案例中使用商品化STR試劑盒(Ampf/STR I

5、dentifiler，Applied Biosystems)未能完整分型的疑難檢材DNA樣本9例，其中高度腐敗尸體血4例，微量檢材3例，腐蝕金屬表面血跡2例(依次編號為1～9)，利用miniSTR分析技術(shù)檢測分析并與商品化STR試劑盒所得結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果： 115份全血樣本中，D1S1677，D2S441，D4S2364，D10S1248，D22S1045五個(gè)miniSTR基因座均獲得了清晰的基因型分型圖譜，擴(kuò)增片段長度均小

6、于125bp。分別共檢出7，8，5，8，8個(gè)等位基因和12，21，10，16，18種基因型，其基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。五個(gè)基因座在中國漢族人群的雜合度觀察值(Ho)和多態(tài)性信息含量(PIC)分別依次為0.6609，0.6957，0.7478，0.7652，0.7826和0.5658，0.7107， 0.5919，0.7106，0.7489；非父排除率(PE)和個(gè)人識別力(PD)分別依次為0.3530，0.482

7、4，0.3637，0.4901，0.5023和0.7954，0.8902，0.8113，0.8913，0.9032。五個(gè)miniSTR基因座的累積非父排除概率為0.9459，累積個(gè)人識別力為0.999953。D2S441與D10S1248兩個(gè)基因座進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，其電泳圖譜清晰，115例樣本均得到完整分型。9例高度降解DNA樣本在五個(gè)miniSTR基因座中均得到了完整分型，顯示了miniSTR技術(shù)比常規(guī)STR試劑盒具有更高的分型成功率。