基于RNA-seq研究柞蠶蛹免疫調(diào)控基因.pdf

1、鱗翅目昆蟲(chóng)的免疫系統(tǒng)與脊椎動(dòng)物不同，只具有先天免疫系統(tǒng)，既沒(méi)有T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞存在，也沒(méi)有補(bǔ)充系統(tǒng)。先天免疫系統(tǒng)又分為體液免疫和細(xì)胞免疫，在昆蟲(chóng)免疫防御中起著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞免疫是通過(guò)血漿細(xì)胞來(lái)吞噬外源物。而體液免疫有分Toll途徑和IMD途徑，不同外源物的刺激可以激活Toll途徑和IMD途徑，促進(jìn)與免疫有關(guān)的各種大分子物質(zhì)產(chǎn)生，這些大分子物質(zhì)包括抗菌肽、溶菌酶和抗菌蛋白等。不同外源物的侵染，激活不同的免疫防御途徑。
　

2、　為明確革蘭氏陽(yáng)性菌與陰性菌對(duì)柞蠶蛹的免疫反應(yīng)機(jī)制，本研究利用革蘭氏陽(yáng)性菌蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringeinsis(Bt)和革蘭氏陰性菌大腸桿菌Escherichia coli(E.coli)為外源物，將菌液調(diào)整至106～108 cfu/mL，滅活后處理柞蠶蛹，分別誘導(dǎo)24，48，72和96 h后測(cè)定血淋巴蛋白含量、酚氧化酶(PO)活性、過(guò)氧化氫酶(CAT)活性、抗菌活性和溶菌酶活性等生理指標(biāo)。Bt和E.coli處理均

3、能引起柞蠶蛹產(chǎn)生明顯防御反應(yīng)，其生理指標(biāo)變化規(guī)律與微生物種類及誘導(dǎo)間和菌液濃度有關(guān)。
　　基于RNA-Seq技術(shù)，分別對(duì)處理組（Bt和E.coli）和對(duì)照組(CK)進(jìn)行測(cè)序，分別產(chǎn)出56.29×106、56.86×106、81.36×106條高質(zhì)量序列，測(cè)序深度達(dá)4G，Q20高達(dá)96％以上，產(chǎn)量和質(zhì)量滿足后續(xù)分析要求。Bt組共有2271個(gè)差異基因，其中有1562個(gè)上調(diào)，709個(gè)下調(diào)。E.coli共有3224個(gè)差異基因，其中有191

4、6個(gè)上調(diào)，1308個(gè)下調(diào)，分別注釋到GO功能的生物過(guò)程、細(xì)胞組分和分子功能3大類共53個(gè)GO分類中;分布在314條KEGG通路中，代謝途徑(Metabolic pathways)最多，而注釋到COG中的25類，其中R(General function prediction only)的最多。
　　利用熒光定量PCR技術(shù)，對(duì)轉(zhuǎn)錄組中篩選的基因進(jìn)行驗(yàn)證，在Bt和E.coli處理的柞蠶蛹中，在不同時(shí)間不同濃度表達(dá)量的變化，為進(jìn)一步揭示柞