簡(jiǎn)介：目的構(gòu)建人3型腺病毒載體嵌入登革熱病毒抗原表位的重組腺病毒，為人3型腺病毒衣殼嵌合載體的應(yīng)用及登革熱病毒疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。方法人3型腺病毒骨架質(zhì)粒PBRAD△E3GFP為模板，搭橋PCR擴(kuò)增六鄰體不同超變區(qū)（HVR）嵌入不同血清型登革病毒抗原表位的六鄰體突變基因片段HEXONDENV，突變的六鄰體片段酶切后克隆到穿梭載體。穿梭質(zhì)粒酶切后與線性化的PBRAD△E3GFP電轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BJ5183進(jìn)行同源重組，鑒定后獲得陽性重組腺病毒質(zhì)粒PBRAD△E3GFPDENV。經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序鑒定登革病毒抗原表位正確插入相應(yīng)HVR后，中抽質(zhì)粒并酶切線性化后轉(zhuǎn)染AD293細(xì)胞包裝重組腺病毒。成功包裝的重組腺病毒經(jīng)大量擴(kuò)增培養(yǎng)及純化后，進(jìn)行熱穩(wěn)定性和生長(zhǎng)曲線分析，WESTERNBLOT和ELISA實(shí)驗(yàn)分析嵌合的登革病毒抗原表位在六鄰體上表達(dá)及在重組腺病毒粒子表面的暴露情況。重組腺病毒免疫BALBC小鼠，通過WESTERNBLOT和ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)免疫小鼠對(duì)重組腺病毒的體液免疫反應(yīng)，微量中和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)抗血清體外中和登革病毒的作用。結(jié)果通過搭橋PCR擴(kuò)增出HVR1嵌入登革病毒1型抗原表位、HVR2插入登革病毒3型抗原表位，HVR5嵌入登革病毒2型抗原表位的突變六鄰體片段。成功將突變的六鄰體片段克隆到穿梭載體后酶切線性化，與線性化的腺病毒骨架質(zhì)粒同源重組后，獲得四個(gè)重組腺病毒質(zhì)粒。在AD293細(xì)胞中成功包裝出在六鄰體HVR1嵌入登革病毒1型抗原表位和在HVR2嵌入登革病毒3型抗原表位的重組腺病毒AD3R1DENV1和AD3R2DENV3，在六鄰體HVR5區(qū)的嵌入登革病毒2型抗原表位的重組腺病毒質(zhì)粒未能成功包裝出重組病毒。重組腺病毒的熱穩(wěn)定性和生長(zhǎng)特性不受插入登革病毒抗原表位影響。登革病毒1型和3型抗原表位在六鄰體蛋白融合表達(dá)并且暴露在病毒粒子表面。WESTERNBLOT，ELISA結(jié)果顯示重組腺病毒免疫小鼠即誘導(dǎo)登革病毒表位特異性抗體。體外中和實(shí)驗(yàn)中，重組腺病毒免疫的小鼠血清對(duì)登革病毒感染C636細(xì)胞中和作用微弱。結(jié)論成功構(gòu)建表達(dá)登革病毒抗原表位嵌合型人3型重組腺病毒重組腺病毒能誘導(dǎo)產(chǎn)生抗原特異性的體液免疫應(yīng)答。

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV慢性感染是全球性的健康問題。全世界共有35億慢性HBV感染者，其中75％為亞洲人。我國(guó)流行的HBV基因型主要為C型和B型。河南省漯河地區(qū)和黑龍江省肇東地區(qū)均屬于HBV低度流行地區(qū)，本研究在2005年HBV感染的調(diào)查基礎(chǔ)上研究?jī)傻貐^(qū)HBV基因型的流行情況和HBVBCP區(qū)和前C區(qū)的變異情況，為兩地區(qū)乙肝防控提供一定的科學(xué)依據(jù)。本研究共分為兩部分第一部分河南省漯河地區(qū)自然人群乙型肝炎病毒基因型的分子流行病學(xué)初步分析目的了解河南省漯河地區(qū)自然人群HBV基因型、血清亞型分布情況及基因型與血清亞型的關(guān)系；分析HBV基因型與臨床類型、HBEAG抗HBE血清學(xué)狀況之間的關(guān)系；分析HBV基因型與血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT的關(guān)系；了解自然人群中HBVS基因的核苷酸水平變異及氨基酸水平變異情況。方法2005年以河南省漯河地區(qū)舞陽縣舞泉鎮(zhèn)、臨潁縣固廂鄉(xiāng)、召陵區(qū)萬金為研究現(xiàn)場(chǎng)，以居民為研究對(duì)象，對(duì)居民進(jìn)行了一次橫斷面血清流行病學(xué)調(diào)查。2006年隨訪2005年HBSAG陽性者296人，采用固相放射免疫SPRIA法檢測(cè)HBSAG、抗HBS、抗HBC、HBEAG和抗HBE五項(xiàng)乙肝病毒感染指標(biāo)，綜合ALT、B超和臨床體檢等結(jié)果，按照2005年12月10日制定的慢性乙型肝炎防治指南和衛(wèi)生部傳染病標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委員會(huì)2007年提出的乙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)報(bào)批稿的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇可作出明確臨床診斷的254例作為研究對(duì)象。其中無癥狀HBV攜帶者144例，慢性乙型肝炎CH110例。男性136例，女性118例。平均年齡35歲。對(duì)從254例研究對(duì)象中抽取的血清標(biāo)本采用巢式PCR法擴(kuò)增HBVDNA。利用QIAAMPDNABLOODMINIKIT，按照試劑盒操作說明書要求從200ΜL血清中提取HBVDNA，以其作為模板，分別設(shè)計(jì)合成2對(duì)引物擴(kuò)增HBVS基因。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，直接將PCR產(chǎn)物送TAKARA利用ABIPRISMTM3730XLDNAANALYZER測(cè)序。利用DNASTAR軟件對(duì)測(cè)序標(biāo)本的核苷酸序列與從GENBANK中獲取的HBVAH各基因型標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對(duì)分析，繪制基因進(jìn)化樹，確定基因型。由核苷酸序列推導(dǎo)氨基酸序列，確定血清亞型。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS130進(jìn)行X2檢驗(yàn)，F(xiàn)ISHER確切概率法，WILCOXON秩和檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜005為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果254例血清標(biāo)本中，HBVS區(qū)陽性者219例，陽性率為8622％。219例標(biāo)本的基因型分布為B基因型22例，占1005％C型197例，占8995％。血清亞型分布為ADR亞型192例，占8767％；ADW2亞型23例，占1050％；AYR亞型3例，占137％；AYW1亞型1例，占046％。22例B基因型標(biāo)本的血清亞型為ADW2亞型21例占9545％，AYW1亞型1例占455％197例C基因型標(biāo)本的血清亞型為ADR亞型192例占9746％，ADW2亞型2例占102％，AYR3例占152％。不同基因型的血清亞型構(gòu)成差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P00000。22例B基因型感染者中，15例6818％為，7例3182％為CH；197例C基因型感染者中，109例5533％為，88例4467％為CH。不同基因型的臨床類型分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P02487。結(jié)論1河南省漯河地區(qū)的HBV基因型分布以C基因型為主，存在少量的B基因型。2河南省漯河地區(qū)的HBV血清亞型分布以ADR亞型為主，存在少量的ADW2、AYR和AYWL亞型。3HBV不同基因型的血清亞型的構(gòu)成不同。B基因型標(biāo)本的血清亞型主要為ADW2，有極少量的AYWLC基因型標(biāo)本的血清亞型主要為ADR，有少量的ADW2和AYR。提示HBV基因型與血清亞型存在一定的相關(guān)性。4大于30歲的B基因型感染者比C基因型感染者更有可能較早的出現(xiàn)HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換。5B基因型感染者與C基因型感染者的ALT水平?jīng)]有差別。6HBVS基因在許多位點(diǎn)有堿基替換現(xiàn)象，近23的位點(diǎn)堿基替換為錯(cuò)義突變。自然人群中存在一定的HBVS基因突變，發(fā)現(xiàn)1例疫苗相關(guān)突變。核苷酸替換的平均頻數(shù)較低，提示S基因相當(dāng)保守。第二部分河南省漯河地區(qū)和黑龍江省肇東地區(qū)自然人群乙型肝炎病毒前C和C基因突變的分子流行病學(xué)初步分析目的了解河南省漯河地區(qū)和黑龍江省肇東地區(qū)自然人群慢性HBV感染者HBVBCP區(qū)T1762A1764、前C區(qū)A1896變異株的流行率；分析兩種變異株感染與HBV基因型、HBEAG抗HBE血清學(xué)狀態(tài)及疾病臨床類型間的關(guān)系；了解兩種變異株感染與ALT水平的關(guān)系。方法河南省漯河地區(qū)以第一部分254份血清中HBVS區(qū)PCR陽性者219份為研究對(duì)象。其中無癥狀HBV攜帶者124例，慢性乙型肝炎CH95例。平均年齡38歲，男性121例，女性98例。黑龍江省肇東地區(qū)2005年，以黑龍江省肇東地區(qū)雙勝村和先鋒村兩個(gè)農(nóng)村為研究現(xiàn)場(chǎng)，以全屯居民為研究對(duì)象，對(duì)全屯居民進(jìn)行了一次橫斷面血清流行病學(xué)調(diào)查，采用固相放射免疫SPRIA法檢測(cè)HBSAG、抗HBS和抗HBC三項(xiàng)乙肝病毒感染指標(biāo)，采用酶聯(lián)免疫ELISA法檢測(cè)HBEAG和抗HBE兩項(xiàng)感染指標(biāo)。結(jié)合1986年這兩個(gè)現(xiàn)場(chǎng)的血清流行病學(xué)調(diào)查資料，綜合ALT、B超和臨床體檢等結(jié)果，按照2005年12月10日制定的慢性乙型肝炎防治指南的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選擇可作出明確臨床診斷且HBVS區(qū)PCR陽性者97例作為研究對(duì)象。其中無癥狀HBV攜帶者78例，慢性乙型肝炎CH12例。肝硬化LC3例，肝細(xì)胞肝癌HCC1例，恢復(fù)3例。平均年齡34歲，男性52例，女性45例。對(duì)從河南省漯河地區(qū)219例研究對(duì)象和黑龍江省肇東地區(qū)97例研究對(duì)象中抽取的血清標(biāo)本采用巢式PCR法擴(kuò)增HBVDNA。利用QIAAMPDNABLOODMINIKIT，按照試劑盒操作說明書要求從200ΜL血清中提取HBVDNA，以其作為模板，分別設(shè)計(jì)合成2對(duì)引物擴(kuò)增HBVC基因。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，直接將PCR產(chǎn)物送TAKARA利用ABIPRISMTM3730XLDNAANALYZER測(cè)序，采用熒光標(biāo)記雙脫氧終止法測(cè)定所擴(kuò)增的HBVC基因。在HBVC基因的測(cè)序結(jié)果中，利用DNASTAR軟件推導(dǎo)出BCP區(qū)1762位和1764位的核苷酸序列，以及前C區(qū)1896位的核苷酸序列，與GENBANK中的HBV參考株進(jìn)行比對(duì)進(jìn)而確定所獲得的測(cè)序樣本中發(fā)生BCP區(qū)和前C區(qū)突變的標(biāo)本。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS130進(jìn)行X2檢驗(yàn)，F(xiàn)ISHER確切概率法，WILCOXON秩和檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理分析，以P＜005為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果河南省漯河地區(qū)分別有4022％和5251％慢性HBV感染者發(fā)生了HBVA1896和HBVT1762A1764變異。黑龍江省肇東地區(qū)有2857％的慢性HBV感染者分別發(fā)生了HBVA1896和HBVT1762A1764變異。結(jié)論1河南省漯河地區(qū)HBVBCP區(qū)T1762A1764雙突變的檢出率明顯高于黑龍江省肇東地區(qū)。河南省漯河地區(qū)與黑龍江省肇東地區(qū)HBVA1896突變的檢出率沒有差別。2河南省漯河地區(qū)抗HBE陽性HBV感染者發(fā)生BCP區(qū)T1762A1764雙突變和前C區(qū)A1896突變的頻率高于HBEAG陽性HBV感染者。3黑龍江省肇東地區(qū)抗HBE陽性感染者發(fā)生前C區(qū)A1896突變的頻率高于HBEAG陽性感染者4河南省漯河地區(qū)HBEAG陽性HBVBCP區(qū)T1762A1764雙突變感染者比野生型感染者有較高的ALT水平。5河南省漯河地區(qū)HBV前C區(qū)A1896突變感染者的ALT水平低于野生型感染者，抗HBE陽性前C區(qū)A1896突變感染者的ALT水平低于野生型感染者，但HBEAG陽性前C區(qū)A1896突變感染者與野生型感染者的ALT水平?jīng)]有區(qū)別。6河南省漯河地區(qū)和黑龍江省肇東地區(qū)C基因型感染者HBVBCP區(qū)T1762A1764G突變的檢出率均高于B基因型感染者，C基因型感染者和B基因型感染者前C區(qū)A1896突變的檢出率沒有差別。7河南省漯河地區(qū)CHBCP區(qū)發(fā)生T1762A1764雙突變的頻率高于。前C區(qū)發(fā)生A1896突變的頻率高于CH。8黑龍江省肇東地區(qū)發(fā)生BCP區(qū)T1762A1764雙突變的頻率和CH沒有區(qū)別CH前C區(qū)發(fā)生A1896突變的頻率高于

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R7337學(xué)校代號(hào)學(xué)校代號(hào)10392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100208學(xué)號(hào)號(hào)200901517福建醫(yī)科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文慢病毒介導(dǎo)慢病毒介導(dǎo)WWOX基因過表達(dá)基因過表達(dá)對(duì)JURKAT及K562白血病細(xì)胞白血病細(xì)胞生物學(xué)特性影響生物學(xué)特性影響的實(shí)驗(yàn)研究的實(shí)驗(yàn)研究EFFECTSOFLENTIVIRUSMEDIATEDWWOXGENEOVEREXPRESSIONONBIOLOGICALPROPERTIESOFJURKATK562HUMANHEMATOPOIETICMALIGNANTCELLS學(xué)位類型型醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士所在學(xué)院院醫(yī)學(xué)技術(shù)與工程學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)與工程學(xué)院研究生崔兆磊崔兆磊學(xué)科、?？?、專業(yè)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)導(dǎo)師林東紅林東紅教授教授胡建達(dá)胡建達(dá)教授教授研究起止日期研究起止日期2010年9月至月至2012年2月答辯日期2012年5月31日二〇一二年二〇一二年六月目錄中文摘要1英文摘要3前言6第一部分WWOX基因過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定8材料與方法8實(shí)驗(yàn)結(jié)果16討論21結(jié)論22第二部分慢病毒介導(dǎo)的WWOX過表達(dá)對(duì)JURKAT及K562白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響23材料與方法23實(shí)驗(yàn)結(jié)果29討論43結(jié)論46第三部分WWOX基因過表達(dá)誘導(dǎo)JURKAT及K562細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制研究47材料與方法47實(shí)驗(yàn)結(jié)果53討論60結(jié)論63參考文獻(xiàn)64綜述69致謝78

簡(jiǎn)介：目的了解天津市源自病人的麻疹病毒野毒株的基因變異狀況及評(píng)價(jià)麻疹減毒活疫苗的免疫保護(hù)效果。方法1采集2002～2008年疑似麻疹患者的咽拭子和尿液標(biāo)本用VEROSLAM細(xì)胞分離麻疹病毒；2提取病毒培養(yǎng)液中的RNA用一步RTPCR方法擴(kuò)增麻疹病毒編碼核蛋白NUCLEOPROTEIN的N基因C端594個(gè)核苷酸片段擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序后與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行生物信息學(xué)分析；3使用GENRUNER軟件篩選N基因C端594個(gè)核苷酸片段的限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)確定BCNⅠ用來建立RTPCRRFLP的麻疹病毒基因分型方法以區(qū)分麻疹病毒疫苗株和中國(guó)流行的野毒株；4采用酶聯(lián)免疫吸附方法對(duì)8月齡以下嬰兒麻疹疫苗初免前的抗體水平進(jìn)行分析了解保護(hù)性抗體的衰減過程；5采用酶聯(lián)免疫吸附方法和中和抗體檢測(cè)法對(duì)接種麻疹減毒活疫苗的健康人群免疫前后的抗體水平進(jìn)行測(cè)定評(píng)價(jià)麻疹減毒活疫苗對(duì)流行病毒株的保護(hù)效果；6采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)2010年麻疹疑似病例血清特異性IGM抗體了解天津麻疹疫情變化趨勢(shì)據(jù)此評(píng)價(jià)麻疹計(jì)劃免疫和2008年麻疹強(qiáng)化免疫的效果。結(jié)果1采集2002～2008年天津地區(qū)散發(fā)和暴發(fā)的麻疹疑似病例標(biāo)本共189份其中132份尿液中分離到57株麻疹病毒陽性分離率為4318％；采集57份咽拭子中分離到23株麻疹病毒陽性分離率為4035％2在所有分離到的80株麻疹病毒株中有11人是咽拭子和尿液同時(shí)陽性取其一做PCR和序列分析鑒定的總數(shù)為69株。69株麻疹病毒經(jīng)對(duì)N基因C端594BP的RTPCRRFLP證實(shí)均為H1基因型其中除2002年1株145％病毒為H1B基因亞型其余均為H1A9855％基因亞型未發(fā)現(xiàn)疫苗相關(guān)株A基因型表明H1A亞型為優(yōu)勢(shì)流行型；3選取24株麻疹病毒進(jìn)行N基因C端450個(gè)核苷酸的種系發(fā)育分析2002～2008年流行的H1A亞型毒株的變異范圍為0002～00381～17個(gè)核苷酸差異表明天津地區(qū)流行的麻疹是由不同麻疹病毒株的多個(gè)傳播鏈引起的；4本論文建立的RTPCRRFLP方法可以區(qū)分中國(guó)麻疹病毒流行株H1A、H1B基因亞型及A基因型疫苗株與序列分析結(jié)果完全一致。該方法簡(jiǎn)便、快速、特異、經(jīng)濟(jì)適用于大量的流行病學(xué)調(diào)查；5對(duì)922名不同年齡組健康人疫苗免疫前后的特異性IGG抗體水平比較顯示其陽性率無顯著性差異；但抗體效價(jià)的幾何平均滴度GMT方差分析提示小于8月齡、高中二年級(jí)和20～25歲三個(gè)年齡組的GMT水平較低其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；6采用中和抗體法評(píng)價(jià)13名8月齡兒童麻疹疫苗初免后IGG抗體對(duì)疫苗株和流行病毒株的保護(hù)作用兩者無顯著性差異表明當(dāng)前使用麻疹減毒活疫苗預(yù)防的有效性；7對(duì)160例8月齡以下嬰兒的麻疹保護(hù)性抗體水平進(jìn)行分析新生兒麻疹I(lǐng)GG抗體陽性率僅為368％到7月齡時(shí)降至125％隨著月齡增長(zhǎng)逐漸衰減；82010年565例疑似麻疹病例中小于8月齡組和大于14歲組共計(jì)509例9009％遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于8月齡～14歲組991％。509例疑似病例實(shí)驗(yàn)室確診329例陽性率高達(dá)6464％表明2008年麻疹強(qiáng)化免疫是有效的但現(xiàn)行麻疹疫苗的免疫程序需要進(jìn)一步調(diào)整。結(jié)論1天津市流行的麻疹病毒株以H1A亞型為優(yōu)勢(shì)流行型N基因C端450個(gè)核苷酸分析顯示流行毒株間有1～17個(gè)核苷酸的差異表明存在多個(gè)不同的傳播鏈其變異屬于抗原漂移；28月齡兒童麻疹疫苗初免后產(chǎn)生的中和抗體對(duì)疫苗株和流行病毒株的保護(hù)作用無顯著性差異表明當(dāng)前使用的麻疹減毒活疫苗用來預(yù)防是有效的；38月齡以下嬰兒麻疹疫苗初免前抗體平均濃度GMC隨著月齡增長(zhǎng)逐漸衰減易感兒增多；不同年齡組健康人群疫苗免疫前后的特異性IGG抗體效價(jià)的幾何平均滴度GMT方差分析提示小于8月齡、高中二年級(jí)和20～25歲三個(gè)年齡組的抗體水平較低結(jié)合2010年麻疹疫情反彈的流行病學(xué)分析提示現(xiàn)行的麻疹疫苗免疫程序需要進(jìn)一步調(diào)整；4本研究建立的RTPCRRFLP方法能夠區(qū)分中國(guó)麻疹病毒流行株H1A、H1B基因亞型及A基因型疫苗株具有簡(jiǎn)便、快速、特異、經(jīng)濟(jì)的優(yōu)點(diǎn)適用于大量的流行病學(xué)調(diào)查。

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簡(jiǎn)介：中國(guó)河南省上蔡縣等地在九十年代中期因非法采供血曾造成局部地區(qū)有償獻(xiàn)血人群中艾滋病病毒HIV感染流行雖然在采供血機(jī)構(gòu)整頓后經(jīng)采供血途徑造成HIV感染的流行已得到了有效的控制但已感染的有償獻(xiàn)血員通過性傳播和母嬰傳播途徑在配偶及嬰幼兒中造成HIV感染的二、三代傳播的情況國(guó)內(nèi)未見詳細(xì)報(bào)道該研究旨在通過血清學(xué)調(diào)查、問卷調(diào)查、縱向研究和分子流行病學(xué)研究方法對(duì)河南省上蔡縣等地兒童及其家庭開展流行病學(xué)研究以闡明當(dāng)?shù)貎和疕IV感染狀況分析流行因素及傳播特點(diǎn)并了解其父母HIV感染狀況、流行因素及其對(duì)艾滋病的知識(shí)、態(tài)度分析當(dāng)?shù)匕滩〔《镜膩喰头植嫉葟亩鵀橹贫A(yù)防控制策略及措施、預(yù)防及阻斷HIV母嬰傳播和性傳播提供依據(jù)控制艾滋病在當(dāng)?shù)氐倪M(jìn)一步蔓延

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多輪狀病毒NSP4基因變異與致病性改變的關(guān)系及其免疫學(xué)特性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的調(diào)查研究寧夏地區(qū)綿羊中的BDV的自然感染狀況。對(duì)陽性檢測(cè)樣本的核苷酸序列進(jìn)行連接測(cè)序，比較分析BDVP24基因序列，建立病毒株的種系發(fā)生樹，闡明其在寧夏地區(qū)綿羊中的自然感染情況及其可能的種系來源；應(yīng)用轉(zhuǎn)染的OL作進(jìn)一步的病毒核蛋白的細(xì)胞內(nèi)定位研究，初步探討病毒的感染和發(fā)病機(jī)制。方法應(yīng)用巢式逆轉(zhuǎn)錄熒光定量PCRFQNRTPCR技術(shù)檢測(cè)中國(guó)寧夏地區(qū)綿羊腦組織和PBMC中的BDVP24和P40基因片段；對(duì)檢測(cè)BDVP24和P40基因片段均為陽性標(biāo)本的P24基因片段進(jìn)行連接、克隆、測(cè)序，并應(yīng)用EMBL、DNASP40和MEGA40軟件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度，構(gòu)建NEIGHBJOINING基因系統(tǒng)發(fā)生樹并分析病毒感染的可能來源；對(duì)轉(zhuǎn)染的OL應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)和WESTERNBLOT的方法觀察病毒核蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)定位。結(jié)果在寧夏地區(qū)163只綿羊腦組織和710只綿羊的PBMC中檢測(cè)到BDVP24和P40陽性基因片段，檢出率分別為368％6163和127％9710；對(duì)15例陽性檢出標(biāo)本進(jìn)行連接、克隆、測(cè)序，連同14例前期檢測(cè)序列基因聚合分析顯示核酸之間的同源相似度為965％～100％，氨基酸的同源相似度為953％～100％。與德國(guó)馬源性標(biāo)準(zhǔn)株HE80同源相似度較高。構(gòu)建基因的系統(tǒng)發(fā)生樹發(fā)現(xiàn)寧夏的VE患者、抑郁癥患者、綿羊和同德國(guó)馬、綿羊、奧地利馬都各自形成了獨(dú)立的支系，其余陽性檢出序列形成混合支系，其中寧夏的VE患者、牛、綿羊同德國(guó)的馬、日本的綿羊形成了‘德國(guó)中國(guó)寧夏日本’的混合支系；在轉(zhuǎn)染BDVP40基因片段的熒光表達(dá)質(zhì)粒的OL內(nèi)激光共聚焦顯微鏡提示核蛋白存在于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜中；WESTERNBLOT的結(jié)果顯示在細(xì)胞膜蛋白中存在核蛋白，而在細(xì)胞漿中未檢測(cè)到該蛋白。結(jié)論中國(guó)寧夏地區(qū)綿羊中可能存在BDV的自然感染；寧夏地區(qū)人和動(dòng)物BDV的感染存在區(qū)域源性BDV獨(dú)立株和國(guó)外傳入基因保守株的多源性；在轉(zhuǎn)染的OL內(nèi)穩(wěn)定表達(dá)了BDV核蛋白，并將其定位在細(xì)胞的結(jié)構(gòu)蛋白中，尤其在細(xì)胞膜中含量更為豐富，推斷其可能在細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或介導(dǎo)病毒感染入胞過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

簡(jiǎn)介：目的本研究是根據(jù)我省歷年來上報(bào)的乙型腦炎資料分析我省乙型腦炎的流行趨勢(shì)，并在不同生態(tài)環(huán)境中捕捉蚊蟲標(biāo)本，找出我省不同生態(tài)環(huán)境中的優(yōu)勢(shì)蚊種，同時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)的方法從蚊體內(nèi)分離病毒，并用常規(guī)PCR和熒光PCR的方法進(jìn)行初步鑒定，篩選乙型腦炎病毒，為以后對(duì)病毒進(jìn)行核苷酸序列分析、鑒定病毒種類、研究我省存在的乙腦病毒與國(guó)內(nèi)、外其他地域同種病毒的差異，繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，進(jìn)而研究病毒的進(jìn)化規(guī)律和分析目前使用的疫苗有無保護(hù)作用打下基礎(chǔ)。方法1資料收集根據(jù)歷年來我省上報(bào)的乙型腦炎資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，參考我省已發(fā)表的有關(guān)此課題的文獻(xiàn)，進(jìn)行分析乙腦流行趨勢(shì)及其原因。2標(biāo)本的收集運(yùn)輸在不同生態(tài)環(huán)境中將捕到蚊子，快速凍死后剔除雄蚊，將蚊子分類，50～100只為一組，裝入凍存管中，用醫(yī)用膠布封口，并用記號(hào)筆編號(hào)，凍存管放入布袋中后及時(shí)放入液氮中，送至實(shí)驗(yàn)室。3根據(jù)在我省不同生態(tài)環(huán)境中采集蚊蟲標(biāo)本結(jié)果，分析我省不同生態(tài)環(huán)境中蚊種的構(gòu)成，找出優(yōu)勢(shì)蚊種。4利用BHK和VERO細(xì)胞培養(yǎng)的方法對(duì)蚊子攜帶的病毒進(jìn)行分離。5用TRIZOLLSREAGENT提取分離到病毒的RNA，再用常規(guī)PCR和熒光PCR方法進(jìn)行初步鑒定。結(jié)果1河南省乙型腦炎發(fā)病情況同我國(guó)總的情況基本一致。自20世紀(jì)70年代后期大規(guī)模使用乙腦疫苗后，除1990與1991年有個(gè)小發(fā)病高峰外，乙腦發(fā)病率在顯著下降，2004年發(fā)病率達(dá)到了03910萬；發(fā)病具有明顯的季節(jié)性，85％以上病例發(fā)生集中在7、8、9三個(gè)月，這與我省蚊蟲出現(xiàn)隨季節(jié)性變化而變化的特點(diǎn)相一致；病例主要分布于氣溫相對(duì)較高、雨量相對(duì)偏多的豫南、豫東南的信陽、駐馬店、南陽市、周口市以及商丘的部分地區(qū)，平頂山、洛陽、偶有集中發(fā)病，黃河以北地區(qū)發(fā)病相對(duì)減少。年齡分布主要集中于10歲以下兒童，占80％以上，5歲以下病例約占50％，男女性別比為14∶1。2本次實(shí)驗(yàn)在我省不同生態(tài)環(huán)境中共捕獲蚊蟲25787只，其中庫蚊18999只，按蚊2715只，伊蚊85只，阿蚊3878只。庫蚊占全部蚊蟲的737％，按蚊占105％，伊蚊03％，阿蚊占15％，可見庫蚊為我省優(yōu)勢(shì)蚊種。山區(qū)、平原和濕地均以庫蚊為主，山區(qū)及濕地未能捉到伊蚊；而丘陵地區(qū)按蚊和阿蚊為優(yōu)勢(shì)蚊種，庫蚊和伊蚊較少；在黃河濕地阿蚊也占一定比例。3隨機(jī)將每個(gè)生態(tài)環(huán)境中所捕蚊子取出10管，組成一個(gè)組，研磨接種細(xì)胞，進(jìn)行病毒分離。共分離到8株可疑病毒，均能引起B(yǎng)HK細(xì)胞和VERO細(xì)胞穩(wěn)定病變。BHK細(xì)胞病變以圓縮和脫落為主，而VERO細(xì)胞病變以聚集、拉網(wǎng)、圓縮為主。出現(xiàn)病變時(shí)一般在48～72小時(shí)之間，均具有濾過性022ΜM濾過膜，其中4株病毒帶回北京進(jìn)行鑒定，其余4株病毒經(jīng)常規(guī)PCR及熒光PCR鑒定發(fā)現(xiàn)有一株為乙型腦炎病毒。結(jié)論河南省于1953年從病人的腦組織中分離到了乙腦病毒，1991年在河南省新安縣采集了淡色庫蚊300只、阿蚊450和三帶喙庫蚊30只，利用細(xì)胞和乳鼠對(duì)全部標(biāo)本進(jìn)行了病毒分離，結(jié)果從淡色庫蚊中分離出1株病毒，經(jīng)間接免疫熒光試驗(yàn)、中和試驗(yàn)等鑒定為乙型腦炎病毒，是河南省首次證明庫蚊是乙腦的傳播媒介，但未能對(duì)分離到的病毒進(jìn)行核酸測(cè)序及鑒定。本次調(diào)查實(shí)驗(yàn)再次證實(shí)庫蚊是河南省的優(yōu)勢(shì)蚊種，并且是乙型腦炎的主要傳播媒介，分離到的病毒經(jīng)常規(guī)PCR及熒光PCR等鑒定初步認(rèn)為是乙型腦炎病毒，為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、病毒核苷酸測(cè)序、判斷乙型腦炎病毒的分型以及分析目前所用的乙腦減毒活疫苗對(duì)本次實(shí)驗(yàn)所分離到的病毒是否有保護(hù)作用打下基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：背景抗病毒是治療慢性乙型肝炎CHB的關(guān)鍵措施干擾素IFNΑ是主要的抗病毒治療藥物之一但I(xiàn)FNΑ治療CHB患者的療效差異較大。因此對(duì)IFNΑ療效的影響因素及預(yù)測(cè)指標(biāo)的研究尤為重要。大量研究顯示其療效受宿主因素、病毒因素及環(huán)境因素的影響宿主免疫遺傳背景的差異可能是導(dǎo)致IFNΑ治療個(gè)體化差異的重要原因之一。本研究旨在探討程序性細(xì)胞凋亡基因PD1兩個(gè)SNPS位點(diǎn)PD11、PD12與中國(guó)漢族CHB患者IFNΑ療效的相關(guān)性以期為個(gè)體化治療提供參考依據(jù)。方法采用前瞻性研究方法對(duì)135例初始抗病毒治療CHB患者的早期病毒學(xué)應(yīng)答情況進(jìn)行評(píng)估并應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性PCRRFLP分析技術(shù)檢測(cè)患者PD11和PD12的單核苷酸多態(tài)性SNPS分別成功鑒別出AA、AG和GG三種基因型按基因型分組分析其與IFNΑ早期病毒學(xué)應(yīng)答的相關(guān)性。結(jié)果135例CHB患者IFNΑ治療獲得早期病毒學(xué)應(yīng)答為33例244％。1、PD11位點(diǎn)①三種基因型組間的性別Χ21105P0575、年齡F0519P0596、治療前ALT水平F0187P0829、治療前HBV病毒載量F0759P0470以及IFNΑ種類Χ20058P0971均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②早期病毒學(xué)應(yīng)答率在AA、AG和GG基因型組中分別為1430、3250和1300在AA、AG和GG基因型三組間存在差異Χ26258P0044。但早期病毒學(xué)應(yīng)答在AA和GG基因型組間無顯著性差異Χ20018P0893由于AA、GG基因型組樣本含量小而AA、GG基因型組間比較P0893故采用卡方分割法將AA基因型組、GG基因型組合并與AG基因型組進(jìn)行卡方檢驗(yàn)Χ26246P0012具有顯著差異所以可以認(rèn)為AG基因型相對(duì)AA、GG基因型有較高的病毒學(xué)應(yīng)答率。2、PD12位點(diǎn)①三種基因型組間的性別Χ20518P0772、年齡F1180P0310、治療前ALT水平F1892P0155、治療前HBV病毒載量F1442P0240以及IFNΑ種類Χ20331P0848均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②早期病毒學(xué)應(yīng)答率在AA、AG和GG基因型組中分別為1820、3140和1430在AA、AG、GG基因型之間比較IFNΑ的早期病毒學(xué)應(yīng)答差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義Χ23957P0138。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)PD11的SNPS可能是中國(guó)漢族CHB患者IFNΑ治療早期病毒學(xué)應(yīng)答的預(yù)測(cè)指標(biāo)有待擴(kuò)大樣本量后再證實(shí)。

簡(jiǎn)介：山東大學(xué)碩士學(xué)位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學(xué)研究姓名宋紹霞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)指導(dǎo)教師王志玉畢振強(qiáng)20050512山東大學(xué)碩士掌位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學(xué)研究研究生宋紹霞導(dǎo)師王志玉教授畢振強(qiáng)主任醫(yī)師中文摘要目的從山東省嚙齒類等動(dòng)物中鑒定漢坦病毒HV，陽性標(biāo)本進(jìn)行RTPCR擴(kuò)增，測(cè)定序列，與以往山東省HV病毒株一起進(jìn)行序列分析和分子流行病學(xué)研究。了解它們的同源性和遺傳距離，掌握山東省不同地區(qū)腎綜合征出血熱HFRS的分布特征，遺傳規(guī)律，進(jìn)化關(guān)系；找出山東省的代表株，克隆其M基因。為從根本上預(yù)防和控制HFRS在山東省的流行打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)并為研制HFRS特異診斷試劑和新型疫苗提供科學(xué)依據(jù)。，方法采集山東省不同地區(qū)的鼠肺標(biāo)本，應(yīng)用間接免疫熒光法IFA鑒定出HV感染的陽性標(biāo)本。根據(jù)GENBANKIIVM基因保守序列及相關(guān)參考文獻(xiàn)應(yīng)用PRIMER5軟件設(shè)計(jì)HTN與SEO型通用引物及將HTN型I型和SEO型II型分型的型特異性引物。通過RTPCR法擴(kuò)增陽性標(biāo)本中FLYM片段部分基因，測(cè)序并用DNASTAR軟件進(jìn)行同源序列比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。觀察山東省IIV堿基變異情況，找出山東省的代表株，進(jìn)行全M片段擴(kuò)增并構(gòu)建克隆載體。測(cè)序并用BLAST軟件進(jìn)行同源序列比較，觀察核苷酸以及所推導(dǎo)的氨基酸變異情況；利用SIGNALP、DNASTAR和TMPRED軟件預(yù)測(cè)其信號(hào)肽序列、疏水區(qū)、抗原區(qū)及跨膜區(qū)，分析氨基酸變異對(duì)HV包膜糖蛋白生物活性的影響。結(jié)果I捕獲2073只嚙齒目和食蟲目動(dòng)物，鑒定出103份IIV感染陽性標(biāo)本，陽性率為497％O2陽性標(biāo)本經(jīng)RTPCR擴(kuò)增，得到26份HV相應(yīng)M片段2003～2302M。3測(cè)序結(jié)果經(jīng)核苷酸序列分析表明26份HV同源性較高在973～100O％，

簡(jiǎn)介：近年來，世界各地?？?0型腸道病毒ECHOVIRUS30，ECH030相關(guān)疾病暴發(fā)逐漸增多，我國(guó)也連續(xù)有多起暴發(fā)報(bào)道。2003年1月至7月，在我國(guó)江蘇省北部地區(qū)發(fā)生的較大規(guī)模的兒童無菌性性腦膜炎暴發(fā)流行中，本課題組從患者腦脊液中分離到了ECHO30病毒，首次明確本次感染的病原，并對(duì)該病毒的生物學(xué)特性進(jìn)行了相關(guān)探討。本研究在此基礎(chǔ)上，依次建立了ECHO30國(guó)內(nèi)流行株血清特異性IGG抗體的間接免疫熒光試驗(yàn)IFA和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA檢測(cè)方法。并初步用于了解人群的ECHO30型無菌性腦膜炎隱性感染情況調(diào)查。在IFA技術(shù)建立過程中，我們使用細(xì)胞爬片法，用分離得到的毒株感染人胚肺二倍體細(xì)胞MRC5制備抗原片，優(yōu)化了IFA染色程序，確定1100和1200兩個(gè)血清稀釋度，1200的異硫氰酸熒光素FITC標(biāo)記的兔抗人及抗鼠IGG稀釋度及伊文氏蘭襯染為最佳染色條件。用建立的IFA技術(shù)篩檢了71份非暴發(fā)地區(qū)兒童血清，其中得到12份為陽性，59份為陰性；47份暴發(fā)地區(qū)兒童血清中，22份為陽性，25份為陰性。研究發(fā)現(xiàn)人群中存在ECHO30型無菌性腦膜炎隱性感染者。所建立的IFA技術(shù)有較好的靈敏度，可初步用于小范圍人群的血清學(xué)檢測(cè)，但并不適用于大面積人群的血清流行病學(xué)調(diào)查。因此，本研究進(jìn)一步探討了ECHO30IGG抗體的間接ELISA檢測(cè)方法。研究使用分離得到的ECHO30病毒株全病毒作為ELISA反應(yīng)體系的抗原，用棋盤滴定法確定ELISA檢測(cè)最佳條件，據(jù)陰性樣品OD值分布情況確定CUTOFF值，建立反應(yīng)體系。結(jié)果確定ELISA反應(yīng)的最佳抗原包被濃度為25ΜGML，血清檢測(cè)最佳稀釋度為1200，HRP羊抗人IGG理想稀釋度為15000，CUTOFF值定為0291。研究對(duì)ELISA檢測(cè)結(jié)果和IFA檢測(cè)結(jié)果做了比較，并以IFA為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)ELISA的靈敏度和特異度進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果確定ELISA檢測(cè)結(jié)果與IFA結(jié)果一致率達(dá)891％，一致性檢驗(yàn)KAPPA值為0742，ELISA的靈敏度和特異度分別為818％和92％。提示兩種檢測(cè)方法在可信度上差別不大，均可用于檢測(cè)血清抗體，但根據(jù)兩種技術(shù)的操作特點(diǎn)，ELISA技術(shù)更適用于大面積人群的血清流行病學(xué)調(diào)杳。為了了解人群ECHO30國(guó)內(nèi)流行株引起的無菌性腦膜炎隱性感染情況及保護(hù)性分布情況，探索ECHO30病毒感染的危險(xiǎn)因素，我們使用所建立的ELISA方法，對(duì)來自上海市不同年齡的412名健康人和來自浙江省德清縣的289名成人健康體檢者血清進(jìn)行了ECHO30IGG抗體檢測(cè)，并進(jìn)行了相應(yīng)比較分析。通過對(duì)上海市區(qū)人群的分析發(fā)現(xiàn)1歲以下嬰幼兒中未見抗體陽性者，15歲以下兒童抗體陽性率較低10％～167％，15歲以上人群抗體陽性率水平明顯升高450％～467％。孕婦與普通人群抗體陽性率無顯著性差異。提示上海市人群中存在隱性感染者，人群通過自然感染獲得免疫保護(hù)，15歲以下兒童為ECHO30感染及發(fā)病的高危人群，母體傳遞給嬰幼兒的抗體水平較低，不能為嬰幼兒提供先天性免疫保護(hù)。對(duì)浙江農(nóng)村人群的分析發(fā)現(xiàn)浙江農(nóng)村成人的隱性感染情況和上海人群基本相似。在這部分調(diào)查中，我們對(duì)ECHO30病毒感染的危險(xiǎn)因素進(jìn)行了單因素和多因素分析，遺憾的是，并未發(fā)現(xiàn)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的危險(xiǎn)因素。目前，我國(guó)尚缺乏常規(guī)的腸道病毒監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，ECHO30信息資料嚴(yán)重不足，我們對(duì)引起多次腦膜炎暴發(fā)的ECHO30具體傳播途徑尚不清楚。根據(jù)本研究的結(jié)果，我們推測(cè)ECHO30病毒的一般感染可能和兒童時(shí)期的特殊行為習(xí)慣有關(guān)。如果出現(xiàn)某種特別的危險(xiǎn)因素，使ECHO30病毒有更多的機(jī)會(huì)接觸缺乏保護(hù)性抗體的兒童，就可能引起無菌性腦膜炎的暴發(fā)。因此在以后的研究中，需要進(jìn)一步改善血清學(xué)調(diào)查技術(shù)，開展更大范圍的血清流行病學(xué)調(diào)查工作，結(jié)合現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)工作和相關(guān)病毒信息，完善病毒監(jiān)測(cè)體系，繼續(xù)探索病毒在人間傳播的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，從而為疾病控制工作提供更為精確的理論指導(dǎo)。

簡(jiǎn)介：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人乳頭病毒16型外殼蛋白高效表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建及目的蛋白的表達(dá)；HPV16型病毒蛋白血清學(xué)檢測(cè)對(duì)宮頸前病變病情監(jiān)測(cè)價(jià)值的初步探討姓名李楠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師章文華200151中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生論文感染，病毒僅停留于感染部位的上皮細(xì)胞內(nèi)，不產(chǎn)生病毒血癥，且病毒基因組的高水平表達(dá)及病毒顆粒的產(chǎn)生僅發(fā)生于宮頸復(fù)層鱗狀上皮表層的終末分化細(xì)胞，與免疫系統(tǒng)不能充分接觸，機(jī)體的免疫應(yīng)答輕微；HPV難以在體外培養(yǎng)，目前尚不能在實(shí)驗(yàn)條件下產(chǎn)生足夠用于血清學(xué)分析抗原制備的乳頭瘤病毒，而病變組織中病毒顆粒的含量又很低。雖然大量的工作已部分地克服了以上困難，但血清學(xué)方法用于宮頸癌及C1N病情監(jiān)測(cè)的研究結(jié)論卻不甚一致。本文以HPVL6為例就研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。1．抗原來源1．1人工合成的病毒蛋白的多肽【8，91。這方面研究較多的是HPVL6的E6、E7和LL蛋白。一些實(shí)驗(yàn)室分別合成了一系列氨基酸序列首尾重疊的短肽，覆蓋蛋白的全序列，以其免疫動(dòng)物獲得抗血清，用基因工程表達(dá)的完整蛋白包被ELISA板或轉(zhuǎn)移于纖維素膜上檢測(cè)抗血清，或用完整蛋白免疫動(dòng)物取得的抗血清檢測(cè)系列短肽，由此確定該蛋白的B細(xì)胞表位，再以確定含有特定表位的肽或直接以系列短肽檢測(cè)人血清，確定某些抗體與疾病的相關(guān)性。然而，覆蓋全長(zhǎng)的多個(gè)短肽仍有可能無法檢出僅存在于完整蛋白序列中的表位，且合成肽成本較高?1。1．2以基因重組技術(shù)用細(xì)菌表達(dá)的融合或非融合蛋白【IOQ21。這種方法得到的蛋白序列比較完整。由于原核表達(dá)產(chǎn)量高，操作簡(jiǎn)便，成本低，產(chǎn)品易于純化，在HPV病毒蛋白，尤其是對(duì)晚期蛋白研究的早期，融合蛋白的研究較廣泛，學(xué)者們利用細(xì)菌表達(dá)的蛋白做WESTERNBLOT，以及利用純化的蛋白做ELISA進(jìn)行血清學(xué)研究，但許多實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果差異較大，主要原因是表達(dá)的病毒蛋白的氨基酸序列完整性不同；攜帶的菌體蛋白可能與人體內(nèi)的細(xì)菌抗體產(chǎn)生非特異反應(yīng)融合蛋白多以包涵體形式獲得，使用時(shí)為變性蛋白形式，影響了病毒蛋白構(gòu)象表位的形成。1．3體外轉(zhuǎn)錄和翻譯的病毒蛋白113,15,49。這種蛋白接近病毒蛋白的天然構(gòu)

簡(jiǎn)介：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文尖銳濕疣病變的人乳頭瘤病毒分子流行病學(xué)研究及L1序列多態(tài)性分析和在原核表達(dá)體系中的表達(dá)姓名洪少林申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)皮膚性病學(xué)指導(dǎo)教師王家璧曾毅200211中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士論文PAGEPBSPCRPVRFLPSDSTAETBS．TTETEⅧDTNFVLPX。堅(jiān)ALPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液POLYMERASECHAINREACTION聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PALIILLOMAVIRUS乳頭瘤病毒RESTRICTIONFRAGMENTLENGTHPOLYMORPHISM限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性SODIUMDODECYLSULFATE十二烷基磺酸鈉TRISACETICEDTABUFFERTAE緩沖液TRISBUFFEREDSALINE．TWEEN吐溫TRIS鹽緩沖液TRISEDTABUFFERTE緩沖液N，N，N’，NTETRAMETHYLETHLENEDIAMINE四甲基乙二胺TUMORNECROSISFACTOR腫瘤壞死因子VINLSLIKEPARTICLE病毒樣顆粒5BROMO一4一CHLORA一3一INDOLYLBDGALACTOSIDE5一溴4M氯一3一嗚哚一BD半乳糖苷北京協(xié)和醫(yī)院2

簡(jiǎn)介：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文EB病毒與T細(xì)胞淋巴瘤關(guān)系的研究①分子流行病學(xué)研究②EB病毒誘發(fā)T細(xì)胞淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究③T細(xì)胞淋巴瘤體外細(xì)胞系的建立姓名黃燕萍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師何祖根曾毅200151巾C目醫(yī)學(xué)豐學(xué)院、協(xié)和醫(yī)科凡4I礴侖艾616％，外用T細(xì)胞淋巴瘤的檢出率為698％。結(jié)外淋巴瘤的檢出率高1。結(jié)內(nèi)淋巴瘸PN∞≯結(jié)果提示，外周T細(xì)胞淋巴瘤與EB病毒有關(guān)，尤其是外周T細(xì)胞淋巴瘤中的J打L管中心性T細(xì)胞淋巴瘤、血管免疫母T細(xì)胞淋巴瘤和間變性大細(xì)胞淋巴瘤。二、EB病毒誘導(dǎo)胸腺惡性T細(xì)胞淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究，為研究EB病毒在惡性T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生中的作用。F將EB病毒感＼染的人胚胸腺細(xì)胞移植于SCID鼠皮下，于移植后第3同起在移植處剝‘側(cè)皮下注射TPA12一OTETRADECANOYLPHORBOL13ACETATE，TPA佛波醇二酯50NG／只，每周一次。實(shí)驗(yàn)設(shè)對(duì)照組為正常胸腺細(xì)胞TPA5只鼠，實(shí)驗(yàn)組為胸腺細(xì)胞EBV組4只鼠，和胸腺細(xì)胞EBVTPA組13只鼠。于移植后第4周起，移植處皮下有結(jié)節(jié)狀隆起形成，并逐漸增大。丁6～15周內(nèi)行病理檢查和免疫組織化學(xué)染色，證實(shí)為T細(xì)胞淋巴瘤8例，其中腳腺細(xì)胞EBV組的成瘤率為25％1／4，胸腺細(xì)胞EBVTPA組的成瘤率為538％7／13，對(duì)照組胸腺細(xì)胞TPA的成瘤率為O％0／5。PCR和原位雜交在誘導(dǎo)腫瘤中可檢測(cè)到EB病毒的基因EBERS、LMPL和BARFL，并有病毒基因LMPI蛋白編碼產(chǎn)物的表達(dá)。VF刃結(jié)果提示EB病毒可感染人胚胸腺細(xì)胞，并使其發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，EB病毒可能是惡性T細(xì)胞淋巴瘤發(fā)生的病因之一。